慢性乙型病毒性肝炎脾虚湿热证差异microRNA的研究

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目的:  1、研究慢性乙型病毒性肝炎脾虚湿热证与microRNA之间的相关性,筛选慢性乙肝脾虚湿热证的潜在差异microRNA,探讨慢性乙肝脾虚湿热证的生物学本质,为中医辨证的客观化提供实验依据。  2、研究中药治疗慢性乙肝脾虚湿热证的临床疗效与microRNA间的关系,筛选慢性乙型病毒性肝炎脾虚湿热证治疗组与对照组的潜在差异microRNA,以期为中医临床疗效评价提供客观依据。  方法:  运用基因芯片技术,对临床采集的慢性乙肝脾虚湿热组、脾虚湿热治疗组与药物对照组、无证可辨组及健康志愿者进行microRNA检测,观察脾虚湿热证与无证可辨、健康对照组间潜在差异表达的microRNA及脾虚湿热治疗组与药物对照组间潜在差异表达的microRNA,采用SPSS20.0系统对所得的计数资料、计量资料进行分析,并运用SAS系统对慢性乙肝脾虚湿热证的潜在差异microRNA、脾虚湿热治疗组与药物对照组间的潜在差异microRNA进行筛选及功能分析。  结果:  1、脾虚湿热组和健康对照组比较,共筛选出差异表达的microRNA162条,121条高表达,41条低表达,其中具有显著差异的microRNA78条(P≤0.05,FC>2倍),60条高表达,18条低表达。  2、无证可辨组和健康对照组比较,共筛选出差异microRNA116条,90条高表达,26条低表达,其中具有显著差异的microRNA35条(P≤0.05,FC>2倍),28条高表达,7条低表达。  3、脾虚湿热证的差异microRNA共有17条(P<0.05;FC>2.0倍),均为高表达,对其进行靶基因预测,功能涉及核心启动子、MAPK、醛固酮合成和分泌、TGF-beta等。  4、脾虚湿热治疗组与药物对照组比较,共筛选出差异microRNA132条,43条高表达,90条低表达,其中具有显著差异的microRNA3条(P≤0.05,FC>2倍),1条高表达,2条低表达。对其进行靶基因预测,miR-4459共涉及57340条、miR-3188共涉及58292条、miR-5196共涉及59233条,功能与14-3-3蛋白结合、网格蛋白介导的内吞作用、β-连环蛋白绑定等相关。  结论:  1、慢性乙肝脾虚湿热证的潜在差异microRNAs为:miR-378a-3p、miR-1275、miR-320a、miR-3188、miR-4455、miR-3676-5p、miR-3141、miR-494、miR-4707-5p、miR-4745-5p、miR-423-5p、miR-4800-5p、miR-939、miR-3135b、miR-1587、miR-4739、miR-197-3p,其调控机制可能与核心启动子、MAPK、PI3K/Akt信号通路等有关。  2、慢性乙肝脾虚湿热证治疗组与药物对照组的潜在差异microRNAs为:miR-3188、miR-4459、miR-5196,其调控机制可能与网格蛋白介导的内吞作用、β-连环蛋白绑定等有关。
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