甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)NJ13菌株是一株对人参锈腐病菌(Ilyonectria robusta)具有较好防病效果的生防菌株。本研究开展了NJ13菌株与人参锈腐病菌DQX01的互作研究,确定了抑制锈腐病菌孢子萌发的互作关键时间点,通过转录组测序技术分析了互作过程中的NJ13菌株的基因差异表达变化和基因表达谱,以期了解NJ13中可能参与抑制DQX01孢子萌发的基因。具体试验结果如下:1.室内显微观察测定了NJ13对DQX01孢子萌发的影响,发现相比于清水对照组,加入NJ13处理的DQX01的孢子萌发率明显降低,NJ13对DQX01孢子萌发的抑制率可达60%以上。同时DQX01的孢子形态随着两菌株共培养时间的延长,孢子逐渐膨大呈“念珠”形状。试验确定接种NJ13后共培养3 h为两菌株互作关键时间点。2.转录组测序共获得了13.73 G数据量。以|log2(FoldChange)|>5为高表达差异基因选择标准,共获得高表达差异基因51个(上调16个,下调35个)。通过对差异表达基因进行显著性富集分析,发现这些差异基因主要富集在分子功能的碳水化合物运输、离子跨膜运输等,以及参与生物学过程的碳水化合物代谢、维生素代谢等。同时,对获得的差异基因进行了代谢通路分析。3.从高表达的基因中,挑选出6个基因分别进行不同时间点的qPCR表达量分析。结果显示,在互作3 h时,基因表达量最高,随着时间延长,基因的表达值皆有下降的趋势,说明互作的关键时间点3 h的选择较为准确。荧光定量结果显示,转录组测序获得的上调差异表达基因经检测表达量依旧上调,下调差异表达基因经检测表达量依旧下调,检测结果同转录组测序结果相一致,说明转录组测序结果可靠。4.从高表达的基因中,选取并设计36个不同基因的引物进行克隆验证,验证目的基因与原始差异基因的相似度,确保转录组测序所得基因的准确性。经克隆成功验证24个目的基因。