【摘 要】
：
目的:验证抗VEGF治疗后纤维化加剧作用因子,构建结缔组织生长因子(CTGF)重组干扰载体(shRNA),观察其对视网膜血管内皮细胞内源性CTGF表达的抑制作用。方法:培养细胞分为空白对照组、高糖组及高糖联合抗VEGF组,以模拟临床中注射抗VEGF药物治疗与否PDR患者体内细胞状态,应用实时定量PCR验证CTGF、FN、α-SMA、ColI表达,收集注射抗VEGF药物与否PDR患者纤维增殖膜,进行
论文部分内容阅读
目的:验证抗VEGF治疗后纤维化加剧作用因子,构建结缔组织生长因子(CTGF)重组干扰载体(shRNA),观察其对视网膜血管内皮细胞内源性CTGF表达的抑制作用。方法:培养细胞分为空白对照组、高糖组及高糖联合抗VEGF组,以模拟临床中注射抗VEGF药物治疗与否PDR患者体内细胞状态,应用实时定量PCR验证CTGF、FN、α-SMA、ColI表达,收集注射抗VEGF药物与否PDR患者纤维增殖膜,进行荧光半定量分析。构建带有mcherry红色荧光标记的人源CTGF重组干扰载体(CTGFshRNA),应用三质粒包装系统获得高滴度的CTGFshRNA慢病毒颗粒,并感染视网膜血管内皮细胞,首先利用干扰载体中的红色荧光标记示踪并筛选慢病毒的最佳感染复数及起效时间,在此基础之上将细胞分为三组,分别为空白对照组,感染对照组及CTGF敲低组。通过Transwell实验观察细胞迁移能力的改变,经实时定量PCR联合Western blot方法量化CTGF的敲低效率及FN、α-SMA、ColI蛋白的表达。结果:高糖联合抗VEGF组中各因子表达量(CTGF:197.35±14.95,FN:3.08±0.47,α-SMA:4.50±1.07,ColI:2.14±0.06)较高糖组(CTGF:2.00±0.14,FN:1.54±0.10,α-SMA:2.24±0.35,ColI:1.97±0.08)明显上升,差异具有统计学意义(F=7.86、4.24、6.03、0.16,P=0.000、0.005、0.03、0.041)。增殖膜荧光结果与其相符。确定在实验体系中感染复数20及起效时间72h为CTGFshRNA慢病毒优化感染条件,可有效降低内源性CTGF表达水平。Transwell细胞迁移实验结果显示,CTGF敲低组穿过小孔细胞数(117.33±19.76)较空白对照组(268.00±30.05)及感染对照组(241.67±39.12)明显降低,差异均有统计学意义(F=20.64,P=0.002)。实时定量PCR实验结果显示:CTGF敲低组中相关因子表达量(CTGF:0.11±0.11,FN:0.14±0.13,α-SMA:0.10±0.09及ColI:0.09±0.04)与空白对照组相比差异具有统计学意义(F=128.83、124.44、144.76、1374.44,P=0.000、0.000、0.000、0.000)。Western blot结果显示:CTGF敲低组中相关蛋白表达量为(CTGF:0.96±0.07,FN:0.99±0.06,α-SMA:0.61±0.06及ColI:0.60±0.01)与空白对照组(CTGF:1.76±0.19,FN:1.72±0.15,α-SMA:1.30±0.16,ColI:1.19±0.08)相比差异具有统计学意义(F=22.55、41.60、25.73、161.68,P=0.002、0.000、0.001、0.000)。结论:抗VEGF药物引起视网膜血管内皮细胞中CTGF等相关因子表达上升,在临床组织中得到验证,成功制备可特异性敲低CTGF表达的CTGFshRNA慢病毒颗粒,初步证实CTGFshRNA慢病毒可有效下调内源性CTGF的表达,抑制细胞的迁移并下调FN、α-SMA、ColI表达,即CTGFshRNA慢病毒是抑制内源性CTGF表达的潜在分子工具。
其他文献
蒸渗仪是研究土壤-植物-大气连续体中水分运移规律的重要设备,在推进农田节约用水、指导节水灌溉、研究作物生长规律等方面发挥了重要作用。蒸渗仪属于无人值守设备,安装场所偏远且位置分散,出现故障通常难以及时发现,严重制约蒸渗仪的正常运行。鉴于此,本文设计了一种基于云平台的蒸渗仪远程故障诊断系统。该系统通过无线通信技术将蒸渗仪采集的数据上传到云平台,并通过卡尔曼滤波算法与阈值检测机制对数据进行异常检测。在
铁路行业关系着国民经济的发展,它承载着我国客货运总量的一半以上。随着我国新时代建设突飞猛进的发展,要求铁路运输业有着更大的运输能力和更快的运输速度。为适应与时俱进的铁路发展形势,近年来我国机车在“重载货运”和“高速客运”两个技术发展方向都取得了巨大突破。列车不仅要“跑的快”更要“停的稳”,而制动系统正是保证列车安全运行的关键系统。制动系统的可靠性、稳定性和安全性十分关键,如果制动系统不能正常稳定工
近几年,我国北方地区逐步推进清洁取暖改造,主要是通过“煤改气”、“煤改电”、“清洁燃煤”等措施。其中,“煤改电”采取的主要供暖方式为电直热模式,这种模式是直接利用电能对居民供暖,存在能源浪费及供热成本高的问题。于此同时,北方地区弃风形势虽然有所好转,但弃风带来的能源浪费仍是一个巨大的数字。针对目前北方地区电供暖存在的问题以及我国风电弃风现状,可以考虑利用弃风进行电供热。利用弃风进行电供热不仅可以消
在世界各地广泛的分布着软土,若不通过处理直接作为工程地基,会存在沉降量过大、承载力不足的问题,如何有效的对软土地基进行处理是岩土工程中经常遇到的问题。常见的软土地基处理措施有换填法、排水固结法以及水泥土搅拌桩法等,根据当地的地质条件合理的选择处理方案是确保地基稳定的关键。本文以波哥大地铁一号线车辆段地基处理项目为依托,通过地质资料分析、室内模型试验、有限元分析等方法,在选定地基处理方案为水泥土搅拌
现阶段的考勤管理系统已能基本完成以前对于考勤管理的基本需求,但对于考勤系统复杂多变的审核流程来说,需要更加实用灵活;同时,高并发请求和访问大量数据的响应性能也是必须
人类对资源的需求随着世界经济不断发展而与日俱增,陆地油气资源的开采已达到历史最高水平且日渐枯竭。海洋油气资源占全球资源总量的34%,浩渺的海洋已成为为人类油气勘探开发的热点。海洋油气开发是我国蓝海战略的重点,海洋石油装备产业方兴未艾,钻井平台作为基础装备也得到长足发展。随着时间的推移,设备老化和更新换代的过程中带来了大量的维修;此外,国家法律法规要求海洋石油钻井平台按期强制法定检验。钻井平台维修是
谷氨酰胺转移酶（Transglutaminase,TGase,EC 2.3.2.13）是一类可以催化酰基转移反应的酶,能促进蛋白质分子间的发生交联,催化蛋白质之间异肽键的形成,对蛋白质的溶解性、乳化能
有机-无机杂化钙钛矿由于具有光吸收系数高、载流子迁移率大、载流子寿命长和散射长度大等优异的光电性质,在太阳能电池、发光二极管、光电探测器和激光发射器等光电领域有着巨大的应用前景。然而,有机-无机杂化钙钛矿的内部结构复杂,在不同的外加偏压和光照条件下表现出特殊的载流子输运性质,尤其是迟滞现象和慢的光响应性质,这两种现象很大程度上影响了钙钛矿基光电器件的表现。钙钛矿单晶由于不存在晶界,缺陷态密度低、带
在信息技术和消费者主权快速发展的背景下,零售渠道变革,全渠道零售应运而生,全渠道零售成为企业间打造竞争优势的利器。全渠道零售概念的出现,是基于大数据、云计算等信息技术快速发展的情形下形成的,打造了综合服务的生态圈,是线上和线下物流深度融合的新型模式。全渠道零售的发展,对物流行业产生了极大影响,也促进者物流行业的变革,物流行业显现出巨大潜力。全渠道零售受到越来越多的关注,但很少有学者对全渠道零售下消
汽车制造业是可以反映国家现代综合工业发展水平的代表行业之一,在目前市场经济体制下扮演了至关重要的角色。合理的营运资金保障了企业的健康发展,提升营运资金管理水平使汽车制造企业能够在竞争激烈的市场中增强盈利能力,扩大经营范围。传统营运资金管理仅通过现金、应收账款、存货和流动负债项目中的应付账款判断企业营运资金运转情况,忽视了各要素之间可能存在的矛盾。同时与实际业务流程相关的供应链理论、客户关系理论、渠