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虫媒病毒(Arthropod-borne viruses)是可通过吸血节肢动物叮咬敏感的脊椎动物而导致疾病在人畜间传播的一类病毒。目前已经发现的虫媒病毒超过550种,其中130多种,包括100余种蚊媒病毒,被证实对人或动物致病。云南省属热带和亚热带气候,蚊虫种类多、分布广,是蚊媒病毒重要的自然疫源地。经过十余年的不懈努力,课题组已在云南省分离到涉及6个病毒科的20多种蚊媒病毒,多种病毒对人畜具有潜在致病性。本研究以2010-2016年在云南省获得的蚊虫标本未知分离物为研究对象,运用已建立的高通量测序技术平台进行鉴定,并对新发现病毒的分子特征进行研究,以明确其分类学地位。同时对具有潜在致病性的病毒进行人群血清学调查,了解人群感染情况,为进一步研究提供线索。通过高通量测序技术,从112份未知分离物中共鉴定出涉及7个病毒科8个病毒属共25种病毒。12种为首次发现的新病毒或变异株,包括1种新环状病毒、1种新Negevirus病毒、1种版纳病毒变异株、2种Toti病毒变异株、1种Omono river病毒变异株、3种新的弹状病毒以及3种新的未分类RNA病毒。另有3种病毒首次在云南采集的蚊虫中分离到,包括环状病毒属的蓝舌病毒(Bluetongue virus,BTV),Negevirus病毒属的Ngewotan病毒(NWTV)以及未分类的RNA病毒温州sobemo样病毒4(Wz SV4)。其中三带喙库蚊中鉴定到病毒种类最多(13种病毒)。新分离的环状病毒的VP2基因与CHe RI环状病毒核苷酸序列同源性最高,为73%,氨基酸序列同源性为75%,其次与云南环状病毒、秘鲁马病病毒同源性较高,分别为68%、69%,是环状病毒属的新的病毒种,暂命名为梁河环状病毒(Lianghe orbivirus,LHOV)。新分离的Negevirus病毒属的曼列病毒(Manglie virus,Ma V),全基因组核苷酸序列与Ngewotan病毒同源性最高,为79%,氨基酸序列同源性为89%,系统进化分析结果显示其与Negevirus病毒属病毒的遗传关系最近,提示为该病毒属的新成员。首次从蚊虫标本中分离到2株蓝舌病毒,基于VP2基因的系统进化分析证实其为血清型2型。新发现的1种版纳病毒(Banna virus,BAV)S1节段的核苷酸序列与以往国内报道的版纳病毒同源性在92%左右,与越南分离株同源性约为83%,提示为版纳病毒变异株。新发现的3种Toti病毒,分别命名为Omono river病毒-YJ(ORV-YJ)、元谋toti病毒(Yuanmou totivirus,YMTV)、永善toti病毒(Yongshan totivirus,YSTV),基因组结构相似,全基因组核苷酸序列同源性为76%-92%,与其他toti病毒的同源性在65%-93%之间,提示为Toti病毒的变异株。为了解新分离病毒的潜在致病性,我们在云南省4个州(县)收集了1622份自然人群血清,利用间接免疫荧光法(IFA)对版纳病毒、南丁病毒、西藏环状病毒Ig G抗体水平进行了调查,结果显示61份血清版纳病毒Ig G抗体阳性,阳性率为3.8%(61/1622);49份血清南丁病毒Ig G抗体阳性,阳性率为3.0%(49/1622);两种病毒阳性血清Ig G抗体效价均为1:80-1:640。未检测到西藏环状病毒Ig G抗体阳性。本研究是在既往研究工作的基础上对云南省蚊媒病毒进行系统调查,发现了多种新的蚊媒病毒,丰富了蚊媒病毒种类。通过人群血清学调查发现了版纳病毒及南丁病毒人群感染的线索,有必要对其致病性做进一步研究。