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研究目的:探讨左乙拉西坦(Levetiracetam,LEV)对马桑内酯(Coriarialactone,CL)致急性分离大鼠海马神经元钠电流增加的影响。
方法:采用7~14d的SD大鼠,雌雄不限,以胰蛋白酶法制备海马神经元,用银染的方法确定细胞为神经元细胞,利用膜片钳放大器(Axopatch200B,AxonInstruments,USA)和Clampex(8.01Axon,InstrumentsUSA)软件,采用全细胞膜片钳技术,记录到能被河豚毒素(TTX)阻断的内向电流,即为Na+电流,然后在细胞外液中加入CL使终浓度达到40μl/ml,CL可使Na+电流增加,将细胞分为蒸馏水空白对照组、LEV7.5μl/ml(150μmol/L)组、LEV15μl/ml(300μmol/L)组、未处理组。每组n=5;观察LEV对电压依赖性钠电流增加的影响。同时应用LEV对神经元进行预处理,先在细胞外液加入LEV15μl/ml,再给予CL,与未经LEV处理组和对照组进行比较,每组n=5;观察LEV对CL所致钠电流的增加有无保护作用。统计学处理采用SPSS11.0统计软件包,自身前后进行配对t检验,多组间比较采用单因素方差分析。
结果:1、在海马神经元上记录到被1μmol/L的河豚毒素(TTX)完全阻断内向电流。
2、加入CL后,钠电流幅度增加,7.5μl/ml、15μl/ml和空白对照组三组最大电流值和电流密度及波幅的增加没有统计学差(P>0.05),具有可比性。
3、给予7.5μl/mlLEV进行干预,钠电流的幅度仍在增加,其最大电流值与最大电流密度自身前后比较,有统计学差异(P<0.05,P<0.01),与未处理组比较无统计学差异(P>0.05)。15μl/ml后钠电增加增加不明显,与7.5μl/ml比较,最大电流值、电流密度、电流增加均有统计学差异(P<0.01)。与蒸馏水空白对照组比较,无统计学差异(P>0.05)。
4、在CL引起峰值钠电流幅度增加后用LEV干预,得到Ⅰ-Ⅴ曲线,对加LEV前后阈电位、最大激活电位进行比较,统计学上无差异(P>0.05)。
5、经40min15μl/mlLEV预处理的神经元在CL作用下仍有明显的钠电流增加,与未处理组比较,最大电流值、最大电流密度、电流增加均无统计学差异(P>0.05),与蒸馏水空白对照组比较,有统计学差异(P<0.01)。
结论:1.LEV不能降低由CL造成的急性致痫海马细胞增加的钠电流。
2.LEV预处理也不能降低CL引起的急性致痫海马细胞钠电流增加。
3.LEV抗癫痫机制可能不是通过抑制钠电流发挥作用。
4、应该寻找其他的耐药癫痫模型为开发新的抗癫痫药奠定物质基础。