苦参碱对肝癌细胞BEL-7402凋亡和自噬相关基因表达的影响

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目的:探索苦参碱对体外培养人肝癌细胞BEL-7402凋亡和自噬的影响,探讨苦参碱干扰肝癌细胞BEL-7402生长的作用机制。方法:采用肝癌细胞BEL-7402为研究对象。常规培养肝癌细胞BEL-7402后随机分为3组:即苦参碱组(1.6mg/ml)、5-FU阳性对照组(7.5ug/ml)及空白对照组,然后采用MTT法和流式细胞仪检测苦参碱对肝癌细胞BEL-7402的增殖情况及其细胞周期的变化,同时用免疫组化法检测细胞内微管相关蛋白LC3-Ⅱ的表达情况,以及MDC染色后,采用荧光显微镜对自噬进行定性观察。结果:MTT检测结果提示:苦参碱对人肝癌细胞BEL-7402增殖有抑制作用。流式细胞仪检测实验数据显示:经苦参碱溶液处理过的人肝癌细胞BEL-7402,S期细胞计数较正常肝癌细胞明显减少,G1期肝癌细胞记数较正常肝癌细胞则明显增多,结果说明苦参碱溶液于肝癌细胞BEL-7402中发生作用后,使部分肝癌细胞BEL-7402不能顺利进入S期进行进一步DNA合成,而是将肝癌细胞BEL-7402阻碍停滞在G1期,最后使肝癌细胞的增殖受到了抑制。荧光显微镜结果显示:肝癌细胞BEL-7402经苦参碱处理后,诱导了自噬泡的产生。通过免疫组化法,我们研究了自噬在蛋白水平的表达,苦参碱作用48h后BEL-7402产生的自噬相关蛋白LC3-Ⅱ水平的表达均上调。结论:苦参碱能显著抑制肝癌细胞生长,影响其细胞周期,诱导该细胞自噬及凋亡,可能与自噬相关蛋白LC3-Ⅱ水平的表达增强有关。
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