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目的:通过检测骨髓瘤患者不同阶段特异性微泡(Microvesicles,MVs)的数量及比例变化情况,掌握不同疾病状态MVs的变化规律,为骨髓瘤诊断及预后判断寻找新的监测指标。方法:1收集初治、缓解、复发多发性骨髓瘤患者及性别年龄匹配的健康志愿者外周血、骨髓液标本。2差异离心法提纯分离外周血及骨髓液中的MVs标本。3透射电镜观察MVs的形态和大小。4流式细胞术检测MVs的数量及特异性MVs的比例,分析临床病人不同阶段浆细胞来源MVs(CD38+CD138+)、内皮细胞来源MVs(CD105+CD45-)及血小板来源MVs(CD41+CD105-)的构成比。BECKMAN流式细胞仪可以清晰分辨1.0um、3.0um标准微球,最低检测下限为200nm,应用1.0um标准微球设定流式细胞仪FSC和SSC参数,利用3.0um标准微球作为计数内参。我们用Calcein-AM染液标记具有完整膜结构的MVs,并设定直径小于1.0um为MVs。5统计分析MVs数量及特异性MVs的比例在健康志愿者、缓解多发性骨髓瘤患者、初治多发性骨髓瘤患者及复发多发性骨髓瘤患者之间的差异,分析评估特异性MVs比例与多发性骨髓瘤临床特征的相关性。结果:1经透射电镜观察多发性骨髓瘤患者外周血血清来源MVs形态结构,多发性骨髓瘤细胞来源的MVs在透射电镜下观察均为直径0.1-1um大小不一、均质的双层磷脂膜包裹的囊泡状结构,这与目前为止国内外所报道的其他细胞分泌的MVs在形态、大小上相一致。2应用BECKMAN流式细胞仪可以比较准确计数标本中MVs的数量。FACS结果显示,多发性骨髓瘤患者外周血及骨髓液中MVs数量明显高于健康对照组(P<0.05),复发患者与初治患者相比MVs数量更多(P<0.05),且初治患者MVs数量比高于缓解患者(P<0.05)。骨髓上清液MVs浓度明显高于外周血上清液MVs浓度,差异有统计学意义(P<0.05)。3用CD38和CD138两个表面标记多发性骨髓瘤细胞中浆细胞来源的MVs,多发性骨髓瘤患者外周血和骨髓液MVs中CD38+CD138+-MVs比例明显高于健康对照组(P<0.05),复发患者CD38+CD138+-MVs比例明显高于初治患者(P<0.05),且初治患者CD38+CD138+-MVs比例明显高于缓解患者(P<0.05)。CD38+CD138+-MVs比例与临床上常用提示肿瘤负荷及预后的指标β2微球蛋白、LDH呈正相关(骨髓液β2微球蛋白:r=0.601,P=0.005)(骨髓液LDH:r=0.720,P=0.000)(外周血β2微球蛋白:r=0.729,P=0.029)(外周血LDH:r=0.621,P=0.018),提示可用于检测肿瘤预后。CD38+CD138+-MVs比例与MM分型、分期之间暂无相关性。4用CD105+CD45-来标记内皮细胞分泌的MVs,用CD41+CD105-来标记血小板分泌的MVs,多发性骨髓瘤患者外周血和骨髓液MVs中内皮细胞来源的MVs比例(CD105+CD45-)及血小板来源MVs(CD41+CD105-)比例均明显高于健康对照(P<0.05),复发患者内皮细胞来源MVs比例及血小板来源MVs比例均明显高于初治患者(P<0.05),且初治患者内皮细胞来源MVs比例及血小板来源MVs比例均明显高于缓解患者(P<0.05),暂未统计到内皮细胞来源的MVs(CD105+CD45-)比例及血小板来源的MVs(CD41+CD105-)比例与肿瘤负荷指标β2微球蛋白、LDH、MM分型及分期之间的相关性。结论:1多发性骨髓瘤患者外周血及骨髓液MVs的数量及特异性MVs的比例与多发性骨髓瘤患者疾病状态密切相关。2多发性骨髓瘤患者外周血及骨髓液内皮细胞来源MVs及血小板来源MVs数量及比例升高,提示内皮细胞和血小板的活化对疾病的发生与进展可能有影响,是骨髓瘤患者血栓高发的潜在可能原因。