论文部分内容阅读
背景和目的侵袭(invation)和转移(metastasis)是恶性肿瘤显著的生物学特性。因此,预防肿瘤侵袭转移是控制肿瘤、提高治愈率及延长患者生存的重要手段。近年来,越来越多的具有抗癌活性的中药逐渐被发掘。黄芪是中医常用的中药之一,黄芪多糖(astragalus polydsaccharide, APS)是黄芪的主要活性成分。研究显示,APS的抗肿瘤作用机制除了提高机体免疫力外,还可能有其它机制的参与。目前,尚未见APS对宫颈癌C-33A细胞侵袭能力影响及相关机制的研究报道。本研究旨在探讨APS对宫颈癌C-33A细胞侵袭能力的影响及机制,以期为APS应用于治疗宫颈癌的可行性提供科学依据。方法1.提取APS并定量。2.实验分组:课题组另外的研究对APS的用药浓度和作用时间进行了探索,根据预实验的结果,本研究所有实验中均以200μg/mL的APS诱导48h的C-33A细胞为实验组,以不加药的C-33A细胞为对照组。3.通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察APS对宫颈癌C-33A细胞迁移和侵袭能力的影响。4.通过逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)和Western blotting等方法检测APS处理前后钙粘附蛋白E (E-cadherin)基质金属蛋白酶-2(matrix metallo-proteinase-2, MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metallo-proteinase-9, MMP-9)等侵袭相关基因表达的变化。结果1.提取的APS的浓度为51.514mg/mL。2.划痕实验结果显示:与对照组相比,APS组C-33A细胞伤口愈合显著减慢。对照组细胞伤口48h基本愈合,72h完全愈合;APS组细胞伤口72h仍未愈合。3. Transwell迁移和侵袭实验结果显示:与对照组相比,APS组C-33A细胞穿过transwell小室基膜的细胞数量显著减少(P<0.01)。4. RT-PCR和Western blotting结果显示:与对照组相比,APS组C-33A细胞中E-cadherin在mRNA水平和蛋白水平的表达均显著增加(P<0.01), MMP-2和MMP-9在mRNA水平和蛋白水平的表达差异均无显著性(P>0.05)。但MMP-2的活性形式显著降低(P<0.01),未见MMP-9活性形式条带。结论1.APS可显著抑制宫颈癌C-33A细胞的侵袭能力。2.APS的上述作用可能与上调E-cadherin表达和抑制MMP-2的活性有关。