卤虫是一种小型甲壳类动物，生活于高盐等极其恶劣的环境中，对高盐、强紫外辐射、低氧以及特殊温度等环境胁迫有极强的抵抗能力。卤虫也是水产养殖中十分重要的一种饵料来源之一，同时在环境保护和监测、制盐业等方面也具有十分重要的作用。因此，近年来卤虫被作为一种模式动物而广泛研究，其研究涉及到卤虫的生物学、生理、生化、遗传、细胞学、孵化和养殖等多方面。与其它模式动物相比，在卤虫基因及基因组方面的研究相对较少。Artemin属于铁蛋白超级家族成员，被认为是一种胁迫蛋白，与卤虫的胁迫反应有关，但对这种蛋白质的研究甚少。本研究通过构建卤虫二期幼虫的cDNA文库，对cDNA克隆进行了部分测序，初步建立卤虫的表达序列标签(expressed sequence tags，ESTs)数据库，为卤虫的分子生物学研究提供了强有力的信息资源，填补了卤虫基因和基因组研究方面的空白。同时，首次克隆卤虫的铁蛋白和artemin的cDNA，并对其分子特性和表达的阶段性调控作了深入的研究，为进一步研究铁蛋白和artemin的功能，以及卤虫的滞育、抗逆机理提供了重要依据。 主要研究结果如下： 1．EST数据库的建立 构建了卤虫二期幼虫的cDNA文库，对672个cDNA进行了5’-部分、单向测序，获得609个cDNA序列。 (1) 序列同源性搜索结果显示，有350个克隆和GenBank中的已知功能的序列具有很高的同源性(E值＜-8)；74个线粒体16S核糖体RNA、2个18S和2个28S核糖体RNA；20个则与未知功能的开放阅读框具有较高的相似性，161个序列则没有任何相似的序列，可能是以前没有鉴定的EST。350个已知功能的EST分别属于219个不同的基因，其中14个是卤虫已经鉴定的基因，205个是首次发现的基因。 (2) 448个具有同源性的序列，根据丰度可以分为四个不同的水平：第一个水平的是高丰度的线粒体16S rRNA；第二个水平的是中等丰度(＞10)，包括Cytb和Cytc氧化酶Ⅰ；第三个水平的是低丰度(2～8)，共有63个不同的基因；第四个水平的是只有一个拷贝的EST。 (3) 按照其编码的蛋白质的功能，可以将所获得的EST分成8类：细胞分裂、细胞结构和运动、代谢、信号传导、细胞防御、蛋白质与基因表达、其它以及未知功能的假定蛋白质。 (4) 对228个编码已知功能的蛋白质或假定蛋白质部分序列的EST中41，048密码子的使用频率和GC含量进行统计分析，并与Homo sapiens、Drosophlia melanogaster两个种进行了比较，发现卤虫与后两者之间的密码子偏爱性、GC——一含量，特别是密码子中第三个碱基的GC含量均存在较大差异。 2．铁蛋白和artemin的cDNA的克隆和分子特性 首次克隆了铁蛋臼和atemin的 cDNA，并对全长进行测序。 （l）Aftemin（接受号：AY062896）的 CDNA由 2，072 hP组成，其中包括－个25 hP的 5－UTR、690 hi。的编码区、1，357 hP的3－UTR和POly（A）尾巴。在CDNA的3－UTR存在两个多聚腺昔酸化信号“AATAAA”分别位于fitl，087－l，092和fltZ，0354040两个不同的位置；而与mRNA分子的加工和多聚腺昔酸化所必需的由 18 hP组成的保守的 GT盒位于fit 885－902；此外还有两个与 mRNA分子的稳定性调节有关的序列“ATTTA”序列和四个变异序列“ATTTTA”。在artemin的3刀TR，AT含量非常高，其碱基组成分别为28．4oA，37．loT，17．2oG，17．30C。推导的氨基酸序列含有230个氨基酸残基，分子量为25，976道尔顿。 铁蛋白（接受号：AY062897）的 CDNA由 74 hp的 5－UTR、sl3 hp的 ORF和 138 hP的 3－UTR组成；一个多聚腺昔酸化信号“ANI：WM”位于fit 687－692；全长以及 3－UTR的碱基组成分别为 31．2OA，28．7OT，19．2oC，20．9OG和 15．4oA，479％T，ZI．3％C，15．4％q 推导的氨基酸序列含有 171个氨基酸残基。 （）将 artemin、卤虫铁蛋白以及其它生物的铁蛋白序列进行比较，发现artemin与铁蛋白的H亚基具有较为明显而有限的相似性，蛋臼质结构预测显示它们具有类似的二级和三级结构，表明artemin属于铁蛋白超级家族成员。 （3）系统比较分析表明，所选择的不同动物的铁蛋白可分成三个亚族：脊椎动物的铁蛋白H，脊椎动物的铁蛋臼L以及鱼类、两栖类的铁蛋臼H，无脊椎动物的铁蛋白，包括卤虫的铁蛋白和artemin，并且卤虫的铁蛋白和artemin与果蝇的铁蛋白有着最近的亲缘关系。 （）Northern分析结果表明，artemin具有两个不同的转录本，一个为 2．Ikb左右，另一个为 3．7 kb。前者的长度与克隆的 CDNA相同，后者其中 3．7 kb的转录本有可能是尚未成熟的mRNA分子。Artemin的表达呈现出随时间递减的趋势，至 16 hr基本停止。铁蛋臼只有一个 0．8 kb的转录本，其表达则在早期发育阶段略高，然后随发育进程不断下降，但在 16 hr还可检测到。 （）PCR结果显示在 artemin基因中不存在内元。 3．基因组步行法扩增art。，min上游调控序列 利用TD－PCR扩增出一个长度为 750 hp的上游调控序列片段，由于序列中含有 POly（G人未能得到全长的测序结果，只得到两个长度分别为 209 hP’ 210 h