金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aueus,SA)是社区和医院获得性感染的主要原因之一,它具有不同的毒力因子和毒素,可导致多种疾病的发生。金黄色葡萄球菌可在人,动物及其产品中定殖。牲畜是金黄色葡萄球菌的重要储存库,人可以通过触摸受感染的动物或其产品感染金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌的存在为人和动物带来了人畜共患感染威胁。抗菌药物的滥用或使用不当,造成金黄色葡萄球菌耐药性的增加,产生了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillinresistant staphylococcus aureus,MRSA)。MRSA菌株对抗菌药物的耐药性是对公共安全的重大挑战。因此,本研究对牦牛屠宰过程中的牦牛鼻腔拭子,皮毛拭子和环境拭子进行采样,分离鉴定金黄色葡萄球菌,并对其流行病学进行调查。另一方面,探讨了硫酸铜溶液连续诱导对MRSA抗菌药物抗性及相关基因表达的影响。主要研究结果如下:(1)共采集样品1069份,分离出金黄色葡萄球菌526株,总检出率为49.20%。其中,鼻腔拭子(310/682,45.45),皮毛拭子(137/215,63.72%),环境拭子(79/172,45.93%)。菌株共携带7种肠毒素基因,在传统肠毒素和新型肠毒素的检测中,sea(12.17%)和selx(79.66%)分别最高;检出毒力基因4种,溶血素类基因hlβ检出率最高(43.35%)和hlα(31.94%)最高;检出抗消毒剂基因3种,qac H基因未检出;5种抗重金属基因均有检出,91.63%的菌株携带两种及以上抗重金属基因。(2)通过mecA序列比对分析共鉴定出MRSA菌株9株,并发现9株MRSA菌株均来自牦牛鼻腔样品。MRSA的主要型别为SCCmecⅣa-ST88-t1376。MRSA菌株共携带8种耐药基因;采用纸片扩散法检测MRSA对24种抗菌药物的敏感性,发现9株MRSA菌株多重耐药率为100%(耐3种及以上抗菌药物)。采用微量肉汤稀释法测定MRSA菌株对硫酸铜,氯化锌,苯扎溴铵,过氧乙酸,戊二醛及次氯酸钠的(minimum inhibitory concentration,MIC),发现MRSA菌株对硫酸铜,氯化锌,苯扎溴铵和过氧乙酸溶液敏感,对戊二醛和次氯酸钠不敏感。(3)硫酸铜溶液亚抑制剂量(1/4 MIC)诱导MRSA菌株实验中,采用微量肉汤稀释法测定经硫酸铜诱导前后MRSA菌株对硫酸铜,苯扎溴铵,过氧乙酸,戊二醛,次氯酸钠及β-内酰胺类、氟喹诺酮类、大环内酯类和氨基糖苷类等抗菌药物的MIC以及诱导前后MRSA菌株的耐药谱变化情况。结果表明,连续诱导7天后,MRSA菌株对硫酸铜溶液的MIC值均有增加;特别是对β-内酰胺类抗菌药物的MIC值增加显著(P<0.05);对消毒剂的MIC和6种抗菌药物的耐药谱无明显变化。(4)硫酸铜溶液亚抑制剂量(1/4 MIC)诱导MRSA菌株,采用荧光定量PCR方法测定硫酸铜诱导对菌株抗重金属基因,耐药基因,毒力基因和肠毒素基因表达影响。结果表明连续诱导后,MRSA菌株的抗重金属基因,相关耐药基因,毒力基因和肠毒素基因的表达均显著上调(P<0.05)。暗示着通过硫酸铜溶液诱导对MRSA菌株抗菌药物抗性效应具有较强的协同效应。