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目的:研究秦皮乙素对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)氧化损伤的保护作用。材料与方法:主要仪器与试剂:人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19(美国ATTC细胞库),秦皮乙素干粉、DMSO、叔丁基过氧化氢(美国Sigma公司),DMEM高糖培养基、胎牛血清、PBS磷酸盐缓冲液(德国BI公司),胰酶(美国Gibico公司),MTS细胞增殖检测试剂盒(美国promega公司),Western及IP细胞裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒、总SOD活性检测试剂盒、MDA检测试剂盒、CAT检测试剂盒、GXH-Px检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司),酶标测定仪(Biotek Gen5),低温台式离心机(德国西门子公司),倒置显微镜(日本尼康公司),细胞计数器、细胞计数板(无锡德凡仪器有限公司);方法:考察秦皮乙素作用24 h时,对细胞ARPE-19活力的影响。抗氧化实验中,秦皮乙素+t-BHP在细胞上同时作用4 h,通过MTS法检测秦皮乙素对细胞ARPE-19抗氧化损伤作用。通过对活性氧簇(ROS)荧光染色,检测秦皮乙素对损伤细胞中ROS水平的影响;采用试剂盒检测秦皮乙素对损伤细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的影响。结果:1.t-BHP对细胞ARPE-19具有氧化损伤作用,可降低细胞存活率,且抑制率与浓度呈正相关。t-BHP浓度为900μM时,ARPE-19细胞存活率约为50%(和正常生长细胞组相比)。2.秦皮乙素具有促进细胞ARPE-19增殖的作用,并与浓度呈正相关性。3.给药造模同时进行组结果显示:秦皮乙素治疗组20μM、40μM、80μM、100μM四个浓度对细胞ARPE-19的氧化损伤均具有保护作用,抑制了t-BHP诱导的细胞ARPE-19死亡。4.先加药后造模组结果显示:与模型组相比,浓度为20μM、40μM、80μM的秦皮乙素治疗组对氧化损伤的细胞ARPE-19具有保护作用。5.先造模4小时,再给药作用4小时秦皮乙素对t-BHP诱导的细胞ARPE-19氧化损伤没有保护作用。5.ROS荧光强度检测结果显示:秦皮乙素20μM、40μM、80μM、100μM四组浓度,浓度依赖性的对损伤细胞ARPE-19内ROS积聚具有抑制作用。6.MDA含量检测结果显示:秦皮乙素20μM、40μM、80μM、100μM四组浓度,浓度依赖性的对损伤细胞ARPE-19内MDA水平具有明显抑制作用。7.SOD活性检测结果显示:秦皮乙素20μM、40μM、80μM、100μM四组浓度,浓度依赖性的对损伤细胞ARPE-19内SOD活性具有明显促进作用。8.GXH-Px酶活力检测结果显示:秦皮乙素20μM、40μM、80μM、100μM四组浓度,浓度依赖性的对损伤细胞ARPE-19内GXH-Px酶活力具有明显促进作用。9.CAT活性检测结果显示:秦皮乙素20μM、40μM、80μM、100μM四组浓度,浓度依赖性的对损伤细胞ARPE-19内CAT活性具有明显促进作用。结论:1.秦皮乙素预先给药、同时给药对体外培养的细胞ARPE-19的氧化应激损伤具有明显保护作用。2.秦皮乙素抑制细胞ARPE-19氧化应激损伤,通过降低ROS、MDA水平,同时上调抗氧化酶SOD、GXH-Px、CAT发挥抗氧化作用。