论文部分内容阅读
目的：Delta样配体4（delta-like ligand4, DLL4）是Notch家族配体之一，受血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF）上调，在肿瘤血管生成中发挥作用。异种移植研究表明抑制DLL4-Notch信号通路能克服对抗VEGF治疗抵抗的作用。本实验通过测定DLL4、VEGF在乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中的表达，并用CD34标记血管内皮细胞，计算微血管密度（microvessel density, MVD）；探讨DLL4、VEGF的表达与乳腺癌血管生成及其临床病理学特征（淋巴结转移、组织分级、患者年龄、肿瘤直径、临床分期）的关系。方法：1.采用手术后的乳腺癌组织石蜡标本60例，另取20例癌旁正常乳腺组织作对照。2.采用免疫组织化学技术（SP法）检测DLL4蛋白、VEGF蛋白和CD34蛋白标记的MVD在癌旁正常乳腺组织、乳腺癌组织中的表达。3.统计学处理：t检验，Pearson χ2检验或连续性校正χ2检验，spearman相关分析，检验标准为P＜0.05有统计学意义。结果：1.免疫组化结果显示DLL4蛋白主要在肿瘤细胞的细胞质和细胞膜表达，VEGF蛋白主要表达在肿瘤细胞细胞质，CD34定位于血管内皮的细胞膜和细胞浆，均呈棕黄色。DLL4在乳腺癌组织的阳性表达率为75%（45/60），明显高于在癌旁正常乳腺组织阳性表达率15%（3/20）（χ~2=22.500，P＜0.001）；VEGF在乳腺癌组织的阳性表达率为70%（42/60），显著高于在癌旁正常乳腺组织的阳性表达率20%（4/20）（χ2=15.345，P＜0.001）；MVD在乳腺癌组织的计数为140.827±22.390，高于在癌旁正常乳腺组织中计数41.57±6.588（t=30.592，P＜0.001）。2.60例乳腺癌组织中，DLL4蛋白在有淋巴结转移组中转移的表达93.10%（27/29）,高于在无淋巴结转移组中的表达58.06%（18/31）（χ~2=9.811，P=0.002）；DLL4蛋白在组织学分级Ⅲ级组表达为100%（15/15），显著高于在Ⅰ～Ⅱ级组表达66.67%（30/45）（χ~2=5.007，P=0.025）；DLL4蛋白在肿瘤直径＞2cm组表达为83.78%（31/37），明显高于在肿瘤直径≤2cm组表达60.87%（14/23）（χ~2=3.972，P=0.046）；DLL4蛋白在临床分期Ⅱ～Ⅲ期组表达83.72%（36/43），高于在临床分期Ⅰ期组表达为52.94%（9/17）（χ~2=4.624，P=0.032）。DLL4蛋白在年龄≤50岁组表达为64.52%（20/31），与年龄＞50岁组的表达86.21%（25/29）相比差异无统计学意义（χ~2=3.760，P=0.053）。3.60例乳腺癌组织中，VEGF蛋白在淋巴结未转移组及淋巴结转移组的表达分别为41.94%（13/31）、100%（29/29），两组比较存在差异（χ~2=24.056，P＜0.001）。VEGF蛋白在组织学分级Ⅰ～Ⅱ级组、Ⅲ级组表达分别为60%（27/45）、100%（15/15），两组间存在差异（χ~2=6.772，P=0.009）； VEGF蛋白在临床分期Ⅰ期组、Ⅱ～Ⅲ期组表达依次增高，分别为41.18%（7/17）、81.40%（35/43），存在差异（χ~2=9.384，P=0.002）。VEGF蛋白在肿瘤直径≤2cm组及＞2cm组的表达分别为60.87（%14/23）、75.68%（28/37），差异无统计学意义（χ~2=1.481，P=0.224）。VEGF蛋白在年龄≤50岁组及＞50岁组的表达分别为64.52%（20/31）、75.86%（22/29），差异亦无统计学意义（χ~2=0.918，P=0.338）。4.60例乳腺癌组织中，DLL4蛋白阳性表达的MVD值为148.191±18.607，高于其阴性表达的MVD值118.733±18.101（t=-5.345，P＜0.001）；VEGF蛋白阳性表达的MVD值为149.810±17.034，高于其阴性表达的MVD值119.867±19.386（t=-5.680，P＜0.001）。且DLL4、VEGF均为阳性表达的MVD值152.822±15.141，明显高于DLL4、VEGF均为阴性表达或只有一项阳性表达的MVD值121.530±18.392（t=-6.844，P＜0.001）。5.相关性分析显示，乳腺癌组织中DLL4的表达与VEGF及MVD值呈显著正相关(rs=0.462，P=0.001；rs=0.553，P＜0.001)，VEGF的表达与MVD值呈显著正相关（rs=0.586，P＜0.001）。结论：1.DLL4蛋白、 VEGF蛋白、MVD在乳腺癌组织中表达均显著高于癌旁正常乳腺组织，高表达可能提示预后不良。2.乳腺癌组织DLL4和VEGF蛋白的表达与淋巴结转移、组织学分级和临床分期密切相关，DLL4蛋白还与肿瘤直径密切相关，提示两者可能在乳腺癌的浸润和转移中起着重要作用。乳腺癌组织MVD值随着DLL4、VEGF表达强度的增强而升高，提示两者可能在乳腺癌组织的微血管形成中有一定的作用。3.DLL4、VEGF在乳腺癌组织中的表达呈正相关，且均与MVD呈正相关，提示VEGF可能是上调DLL4的重要因素之一，两者在乳腺癌组织浸润、转移及微血管形成中可能有协同作用。