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目的1.观察益气活血中药对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞(CMECs)增殖、迁移和管腔结构形成不同环节的干预作用,及其对细胞增殖相关蛋白激酶(ERK)和细胞死亡相关分子(p53)m RNA表达的影响,明确其促血管生成作用的生物学效应及最佳剂量。2.研究益气活血中药干预下心肌梗死患者血浆mi R-223-3p、mi R-132-5p的动态变化,为中医药治疗心肌梗死提供临床依据。方法1.实验研究选取220-280g成年雄性SD大鼠,通过结扎左侧冠状动脉前降支(Left Anterior Descending Cor,LAD)建立心肌缺血模型,植块法培养CMECs。动物灌胃法制备大鼠芪参益气滴丸高剂量(Q-G)、中剂量(Q-Z)、低剂量(Q-D)含药血清,分别与大鼠缺血CMECs共孵育。同时制备空白血清,分别与心肌缺血模型大鼠(MX)、正常大鼠(ZC)来源的原代CMECs共孵育。观察血管新生的生物学特征,噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线并检测细胞增殖能力,划痕法测定细胞迁移能力,倒置相差显微镜下观察成管情况,确定CMECs血管新生的迁移、增殖、成管的窗口期;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测ERK和p53 m RNA的表达情况。2.临床研究选择急性心肌梗死(AMI)患者30例,健康志愿者10例。将AMI患者随机分为治疗组和对照组各15例。治疗组予常规西药联合益气活血中药治疗,对照组予常规西药治疗。健康志愿者于入组时,治疗组和对照组于入院后1h及治疗后第3天、第7天、第14天时抽取肘静脉血,real-time PCR检测mi R-223-3p、mi R-132-5p的表达情况。结果1.实验研究(1)本研究共涉及雄性SD大鼠39只,其中灌胃20只,心梗模型19只。每只灌胃大鼠最终可经腹主动脉抽取血清5-10ml。大鼠急性心梗模型手术成功率为89.47%,模型大鼠24h至72h内死亡1只,急性期存活率为94.12%。(2)心肌细胞培养结果回示,增殖窗口期Q-Z、Q-D组为第2天,Q-G、ZC组为第3天,MX组为第6天;迁移、成管窗口期各组均分别为12h及第2天。Q-G、Q-Z、Q-D组增殖率、迁移率及成管率均高于MX组,其中Q-D组增高最明显(P<0.01);Real-time PCR检测结果表明,与MX组比较,Q-G、Q-Z、Q-D组ERK m RNA表达增加,p53 m RNA表达降低(P<0.05)。2.临床研究(1)中医症状积分比较治疗前,治疗组和对照组中医症状积分为19.73±5.21、20.62±4.34,两组比较无统计学差异(P>0.05)。治疗后,治疗组和对照组中医症状积分为6.42±3.56、11.47±4.26,两组比较有显著差异(P<0.01)。(2)心电图疗效比较总有效率治疗组为78.57%,对照组为64.29%。经秩和检验,有统计学差异(P=0.038,P<0.05)。(3)mi R-223-3p、mi R-132-5p表达特征与健康志愿者比较,AMI患者入院后1h mi R-223-3p表达水平明显升高且有显著统计学意义(P=0.000,P<0.01),治疗后逐渐降低,在第7天时下降趋势趋于缓慢,基本进入平台期,并持续到第14天;mi R-132-5p表达水平明显下降且具有显著统计学意义(P=0.000,P<0.01),入院后继续降低至第3天,之后逐渐上升并持续到第14天。(4)治疗前后血浆mi R-223-3p表达量比较治疗前,治疗组、对照组mi R-223-3p表达分别为(13.126±0.452)、(13.015±0.522),无统计学差异(P=0.12,P>0.05);治疗后,治疗组、对照组mi R-223-3p表达分别为(2.172±0.756)、(5.630±1.120),与治疗前相比,两组均出现不同程度的下降,均具有统计学差异(P=0.000,P<0.01)。与对照组比较,治疗组mi R-223-3p水平下降更为显著(P=0.000,P<0.05)。(5)治疗前后血浆mi R-132-5p表达量比较治疗前,治疗组、对照组mi R-132-5p表达分别为(0.159±0.019)、(0.160±0.025),无统计学差异(P=0.878,P>0.05);治疗后,治疗组、对照组mi R-132-5p表达分别为(0.507±0.077)、(0.298±0.061),与治疗前比较,两组均出现不同程度上升,均具有统计学差异(P=0.000,P<0.01)。与对照组比较,治疗组mi R-132-5p水平上升更为显著(P=0.000,P<0.05)。结论1.益气活血中药可通过提高大鼠缺血CMECs的增殖率、迁移率、成管率以及使增殖窗口期提前以促进其血管新生功能。本次研究结果低剂量含药血清促血管生成作用最明显,但并不能确定其即为最佳剂量。2.益气活血中药促进大鼠缺血CMECs血管生成的作用,可能与ERK及p53的差异表达有关。3.益气活血中药联合常规西药治疗AMI较单纯常规西药治疗更能获得较好的临床疗效,其作用机理可能与调节mi R-223-3p、mi R-132-5p的表达有关。而在心肌梗死发病初始,mi R-223-3p较mi R-132-5p可能会更早进入窗口期。