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论文以肉苁蓉属4种肉苁蓉(荒漠肉苁蓉、盐生肉苁蓉、管花肉苁蓉和沙苁蓉)为材料,利用差异蛋白质组学研究技术,研究了肉苁蓉属可溶性蛋白质的特性,主要结果如下:
1.建立了适合肉苁蓉属可溶性蛋白质的SDS-PAGE凝胶电泳技术方法:1)建立了肉苁蓉属可溶性蛋白的提取方法:采用冷冻干燥→提取液[1mol/LFris-HCL(pH6.8)5%(V/V);双蒸水75%(V/V);PVP2%;苯甲基黄酰氟(PMSF)1mmol/l]→4℃离心→5mol/L的KAc沉淀→4℃离心→-20℃丙酮沉淀→4℃离心的技术路线,能较好的提取肉苁蓉的可溶性总蛋白,避免多糖、酚类等杂质成分对后续电泳的干扰。2)建立了适合肉苁蓉属可溶性蛋白质SDS-PAGE电泳技术方法:电泳时采用的参数为:浓缩胶T=3%;分离胶T=16%;电泳开始时电压为180V,电泳进入分离胶时电压调为210V。
2.采用SDS-PAGE电泳分离技术和AlphaImager2200软件分析方法,对4种肉苁蓉蛋白质表达谱进行比较研究,肉苁蓉属的4种肉苁蓉在电泳胶上清晰地分离出大约15条蛋白带,多态性条带占86.67%,蛋白带分子量范围为15.9KD~84.1KD。四种肉苁蓉都具有两条可溶性蛋白图谱共有条带,其分子量分别为29.4KD、23.2KD,其它13条带有不同程度的差异。分子量为21.5KD是沙苁蓉特有的条带、分子量为84.1KD是管花肉苁蓉特有的条带、分子量为17.5KD条带是盐苁蓉特有的条带、分子量为18.5KD是荒漠肉苁蓉特有的条带。
3.利用LC-MS/MS液质联用的串联质谱和MASCOT检索蛋白质数据库,鉴定了各个种的特异蛋白带。沙苁蓉特异蛋白质条带共鉴定出9个蛋白质,荒漠肉苁蓉特异蛋白质条带共鉴定出15个蛋白质,盐生肉苁蓉特异蛋白质条带共鉴定出26个蛋白质,管花肉苁蓉特异蛋白质条带共鉴定出20个蛋白质,其中有7未知蛋白(unknownprotein)或未命名蛋白(unnamedprotein)。沙苁蓉的特异蛋白大部分是与合成有关的酶;荒漠肉苁蓉的特异蛋白大部分是与抗逆和能量代谢有关的酶;管花肉苁蓉的特异蛋白大部分是与抗逆有关的酶和结构蛋白;盐生肉苁蓉的特异蛋白大部分是与信号传递有关的蛋白。
4.研究了5个不同寄主的管花肉苁蓉可溶性蛋白SDS-PAGE电泳图谱,其多态性条带为77.78%,在胶上清晰的分析出9条带,分子量范围为14.8~87.0KD。分子量为46.5KD和29.6KD是5个材料共有的带,其它7条带有不同程度的差异。
5.以8个经过航空搭载的荒漠肉苁蓉种子的M1代群体为研究材料,对8个材料的可溶性蛋白质进行SDS-PAGE分析,8个材料的可溶性蛋白的SDS-PAGE图谱,在胶上清晰的分析出5条带,其多态性为80.00%,其分子量范围在31.9~65.3KD之间。如在分子量为45.5KD和31.9KD2条带是8个材料共有的带,其它3条带有不同程度的差异。
对肉苁蓉属差异蛋白质组学的研究,可为其品质形成的分子机理和生理机理的研究奠定基础,也可以为肉苁蓉属种质鉴定、亲缘关系分析提供理论依据。