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目的:DEHP是一种广为存在的环境污染物,在全世界范围被用作许多制剂的增塑剂和溶剂。本实验通过检测不同浓度DEHP暴露对小鼠精原细胞Bax和Bcl-2表达水平的影响,进一步探讨DEHP所致精原细胞的增殖、凋亡作用及其雄性生殖毒性的作用机制。 方法:将小鼠精原细胞分别暴露于浓度为0mg·L-1(对照组)、10mg·L-1(低剂量组)、100mg·L-1(中剂量组)、1000mg·L-1(高剂量组)DEHP的完全培养基中培养24h和48h,采用MTT法检测细胞相对活力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR法检测Bax和Bcl-2 mRNA的表达情况及Western blot技术检测Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。 结果:⑴在检测细胞相对活力时,DEHP暴露24h后,1000mg·L-1剂量组明显低于其它各剂量组,100mg·L-1剂量组低于对照组和10mg·L-1剂量组(P<0.05);DEHP暴露48h后,各剂量组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),并呈现剂量反应关系。⑵在检测细胞凋亡时,随着染毒剂量的增加,小鼠精原细胞的早期和晚期凋亡率呈逐渐上升趋势,总凋亡率明显升高(P<0.05)。DEHP染毒24h后,早期凋亡率1000mg·L-1剂量组高于对照组(P<0.05);晚期凋亡率1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组均明显高于对照组,1000mg·L-1剂量组高于10mg·L-1剂量组(P<0.05);总凋亡率呈现明显上升趋势,其中1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组明显高于对照组,1000mg·L-1剂量组还明显高于10mg·L-1剂量组(P<0.05)。DEHP染毒48h后,早期凋亡率各剂量组均明显高于对照组,1000mg·L-1剂量组高于100mg·L-1和10mg·L-1剂量组(P<0.05);晚期凋亡率1000mg·L-1剂量组均高于其他各组(P<0.05);总凋亡率各剂量组均明显高于对照组,1000mg·L-1剂量组高于100mg·L-1和10mg·L-1剂量组(P<0.05)。⑶实时荧光定量PCR检测中,DEHP染毒24h后,Bax mRNA表达水平1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组明显高于对照组,1000mg·L-1剂量组与10mg·L-1剂量组比较差异具有统计学意义(P<0.05);Bcl-2 mRNA表达水平1000mg·L-1剂量组低于10mg·L-1剂量组和对照组(P<0.05);此外,Bax和Bcl-2 mRNA比值1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组均明显高于对照组,1000mg·L-1剂量组高于10mg·L-1剂量组(P<0.05)。DEHP染毒48h后,Bax mRNA表达水平1000mg·L-1剂量组明显高于其他各组,100mg·L-1剂量组高于10mg·L-1剂量组和对照组(P<0.05);Bcl-2 mRNA表达水平各剂量组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),并呈现下降趋势;Bax和Bcl-2 mRNA比值1000mg·L-1剂量组明显高于10mg·L-1剂量组和对照组(P<0.05)。⑷Western blot显示,DEHP染毒24h后,Bax蛋白表达水平1000mg·L-1剂量组高于对照组(P<0.05);Bcl-2蛋白表达水平各剂量组与对照组比较差异均具有统计学意义,且1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组明显低于10mg·L-1剂量组和对照组(P<0.05);此外,Bax/Bcl-2两蛋白比值1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组明显高于对照组,而1000mg·L-1剂量组高于10mg·L-1剂量组(P<0.05)。DEHP染毒48h后,Bax蛋白表达水平各剂量组间比较差异无统计学意义(P>0.05);Bcl-2蛋白表达水平1000mg·L-1剂量组明显低于对照组和10mg·L-1剂量组(P<0.05);Bax/Bcl-2两蛋白比值1000mg·L-1和100mg·L-1剂量组均高于对照组(P<0.05)。 结论:DEHP可诱导小鼠精原细胞相对活力下降,通过抑制Bcl-2 mRNA和Bcl-2蛋白表达及促进Bax mRNA和Bax蛋白表达实现诱导精原细胞凋亡。