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大叶白麻(Poacynum hendersonii),是夹竹桃科(Apocynaceae)白麻属(Poacynum)的一种直立半灌木,与罗布麻属的罗布红麻(Pocynum venetum)、白麻属的白麻(Pocynum pictum)一起被人们统称为罗布麻。尽管大叶白麻资源量较大,在新疆、青海、甘肃等干旱地区广泛分布,但目前其仅作罗布红麻的替代品使用。为了促进大叶白麻资源的开发利用,本论文选择青海省格尔木市产大叶白麻叶为实验材料,对其成分组成及保肝活性进行了研究,内容包括:大叶白麻总黄酮超临界CO2提取的最佳工艺优化,常规柱色谱技术对其化学成分的分离,高速逆流色谱技术对大叶白麻主要成分的快速制备,HPIC-DAD-ESI-MS和毛细管电泳技术对大叶白麻中黄酮和多糖类成分的分析;以肝癌细胞为载体,采用酒精损伤模型对大叶白麻各提取物保肝活性的研究,具体结论如下:
1.综合考虑单因素实验和正交实验结果,优化得出的最佳超临界CO2萃取条件为:萃取温度45℃、萃取压力20 Mpa、萃取时间2 h、夹带剂为酸碱度为10的70％乙醇,用量为900 mL。在该工艺条件下大叶白麻总黄酮的提取率为5.28%,高于溶剂提取法的提取率。
2.采用硅胶、聚酰胺柱层析及Sephadex LH-20纯化技术对大叶白麻提取物的乙酸乙酯及正丁醇部分进行了研究,共得到4个黄酮类化合物,经1H-NMR和13C-NMR鉴定最终确定为槲皮素、异槲皮苷、槲皮素-3-O-槐糖苷和三叶豆苷。
3.选取正丁醇-石油醚-0.5%醋酸体系,采用高速逆流色谱技术对大叶白麻中的三个主要成分进行了快速制备,经1H-NMR和13C-NMR鉴定确定为异槲皮苷、槲皮素-3-O-槐糖苷和异槲皮苷-6"-丙二酸酯,纯度分别为94.08%,96.15%,97.13%。4.采用HPLC-DAD-ESI-MS技术,从化学成分上对大叶白麻及罗布红麻进行了比较分析。结合其色谱及质谱数据与文献记载已知化合物的数据,对二者色谱图中全部24个峰中的18个峰进行了指认,发现二者有14个共有成分。另外,本章还对二者所共有的七种黄酮类成分进行了定量分析,发现大叶白麻有六种黄酮的含量高于罗布红麻。
5.采用热水法对大叶白麻叶多糖进行提取,经Sevag法脱蛋白、活性碳脱色、乙醇沉淀,然后采用葸酮.硫酸比色法测定了粗多糖含量,用高效毛细管电泳分析其单糖组分。测定结果表明,大叶白麻中多糖含量为0.97%,含有9种以上的单糖,含量较多的为半乳糖、阿拉伯糖和甘露糖。
6.以肝癌细胞Hep G2为载体,运用酒精损伤模型对大叶白麻各提取物的保肝活性进行了研究。结果表明,当大叶白麻各提取物为中高浓度时可明显提高酒精损伤后细胞的存活率、细胞总蛋白、GSH、SOD和CAT的含量或活力,并降低培养液中的ALT、MDA含量,这表明大叶白麻各提取物具有保护肝损伤作用。