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本研究采用逆转录病毒载体介导的RNAi技术靶向抑制性别决定相关基因Zfy的表达，研究Zfy基因在生精过程中的相关功能及小鼠后代性别比例的变化。通过构建逆转录病毒载体Retrovirus/Zfy-shRNA和质粒载体Psilencer/Zfy-shRNA，用构建好的病毒载体和质粒载体转染小鼠生精细胞，应用qRT-PCR检测各组细胞中Zfy基因的mRNA表达水平,验证干扰载体对Zfy基因的沉默效应。大量包装生产病毒颗粒和制备质粒载体并对公鼠进行睾丸打点注射，每隔7d注射1次，连续注射4次，最后一次注射14d后，部分雄鼠宰杀采集睾丸组织，qRT-PCR检测Zfy基因的表达水平；另一部分雄鼠与每组超排处理的雌鼠按1:1合笼，间隔5d合笼1批雌鼠，共合笼3批，观察后代的性别比例。结果显示，逆转录病毒Retrovirus/Zfy-shRNA和质粒载体Psilencer/Zfy-shRNA转染小鼠生精细胞后，Zfy基因mRNA表达水平都极显著低于空载体对照组和空白对照组（P<0.01），两对照组之间无差异显著性（P>0.05）；睾丸注射逆转录病毒Retrovirus/Zfy-shRNA和质粒载体Psilencer/Zfy-shRNA后，Zfy基因mRNA表达水平都极显著低于空载体组和生理盐水组（P<0.01），两对照组之间无差异显著性（P>0.05）；睾丸注射逆转录病毒载体Retrovirus/Zfy-shRNA的雄鼠组间隔5d交配1次，得到第1次交配出生的后代平均雌鼠率为71.43%，极显著高于空载体对照组（P<0.01），显著高于生理盐水对照组（P<0.05），第2、3次交配的后代平均雌鼠率逐渐降低，与对照组相比差异不显著（P>0.05）；睾丸注射质粒载体Psilencer/Zfy-shRNA的雄鼠组间隔5d交配1次，得到第1、2次交配出生的后代平均雌鼠率分别为71.00%和73.21%，都极显著高于空载体对照组（P<0.01），都显著高于生理盐水对照组（P<0.05）；第3次交配的后代平均雌鼠率为63.64%，显著高于空载体对照组（P<0.05），但与生理盐水对照组之间差异不显著（P>0.05）。综上所述得出如下结论：成功构建了抑制小鼠Zfy基因表达的RNAi逆转录病毒载体和质粒载体，通过干扰Zfy基因的表达实现了对小鼠受精前的性别控制，同时也为研究其它动物受精前的性别控制奠定了基础。