论文部分内容阅读
目的通过应用RT-PCR技术检测急性白血病(AL)儿童骨髓(MB)、外周血(BP)单个核细胞中PRAME mRNA表达情况,并与WT1 mRNA表达相比较,探讨PRAME基因同疗效、预后之间的关系,以及与WT1基因表达的相关性,为实现微小残留白血病的监测提供可行的方法及分子标记物。方法应用半定量RT-PCR方法,检测51例AL患儿MB、BP中PRAME mRNA的表达情况及表达水平。其中未缓解组(初发+复发)40例,包括初发34例(ALL 24例,AML 10例);复发6例(ALL 5例,AML 1例)。缓解组11例,( ALL 9例,ANLL 2例)。对照组25例。同期与WT1 mRNA的表达情况进行比较,并结合疗效、预后进行综合分析。4例初发AL患儿进行跟踪随访,在初发、诱导缓解治疗第19天、第33天及随访过程中分别检测骨髓PRAME mRNA、WT1 mRNA表达情况,分析基因表达水平随病情进展的变化。明确应用RT-PCR技术检测PRAME基因表达水平应用于MRD的可行性。结果1.未缓解组中17例PRAME mRNA表达阳性,总阳性率为42.5%。其中初发组与复发组阳性率(35.3%,50.0%)比较无统计学差异(p=0.195)。ALL组与AML组阳性率(41.4%, 45.5%)比较无统计学差异(p=1.000)。缓解组与对照组中均无PRAME mRNA表达。未缓解组PRAME mRNA表达率与缓解组(p1= 0.030)、对照组(p2= 0.000)比较均具有显著统计学意义。2.未缓解组中,PRAME基因与WT1基因表达一致率(均为阳性或阴性)57.5%(23例)。其中一种基因表达的阳性率为67.5%(27例),统计学分析PRAME与WT1基因在儿童AL中表达无相关性(p=0.337)。3. 6例在发病初期同时收集MB及BP的AL患儿进行PRAME mRNA、WT1 mRNA半定量分析,发现外周血MNC中PRAME mRNA、WT1 mRNA表达水平与骨髓中的表达水平一致,经统计学分析无显著差异(P>0.5)。4. 34例初发患儿中CR率88.2%(30例)。其中初诊时PRAME基因、WT1基因表达均为阳性和均为阴性组患儿的CR率分别为62.5%,100%,两组比较有显著统计学差异(p=0.049)。5.短期随访(1个月～13个月)观察4例初发AL患儿。其中2例经正规化学治疗达完全缓解时,PRAME基因和WT1基因表达水平均下降并逐渐转为阴性,目前仍在随访中,PRAME基因、WT1基因表达持续阴性,患儿为临床完全缓解。另外2例患儿第1疗程结束未达临床缓解,PRAME基因、WT1基因持续高水平表达,放弃治疗。结论1.PRAME基因在儿童急性白血病细胞中呈高水平表达,可作为一种重要的“泛白血病标记”。2.骨髓与外周血中PRAME mRNA、WT1 mRNA表达水平一致,可应用外周血替代骨髓进行MRD监测。3.PRAME基因与WT1基因在儿童AL中的表达无相关性,但两者均表达阳性时CR率显著降低。两者联合用于微小残留病的监测可为64.7%的AL患儿找到监测靶点。4.应用RT-PCR方法跟踪监测PRAME mRNA表达水平的变化,可在一定程度上了解患儿体内白血病细胞的负荷,有助于指导治疗,有望成为微小残留白血病的监测指标。