论文部分内容阅读
野菠萝为露兜树科(Pandanaceae)露兜树属(Pandanus)植物露兜树(Pandanus tectorius Soland.)的果实(Pandanus tectorius fruit,PTF)。在我国海南地区,野菠萝作为一种民间验方用来治疗高脂血症,具有悠久的应用历史。本课题组前期研究证明,野菠萝提取物对高脂饲料诱导的高脂血症动物模型具有良好的治疗效果,并确定其主要的降血脂活性成分为咖啡酰奎宁酸类天然产物。本论文通过体外细胞实验方法针对野菠萝提取物中得到的7种咖啡酰奎宁酸类化合物进行了降脂活性筛选及作用机制研究。本实验利用油酸诱导建立HepG2细胞脂质堆积模型,针对野菠萝中咖啡酰奎宁酸类天然产物抑制细胞内脂质堆积的活性进行筛选,采用噻唑兰染色法(MTT)评价各种活性天然产物不同浓度对HepG2细胞的细胞毒性;进一步利用分光光度法和显微镜观察法,系统研究活性化合物抑制细胞内脂质堆积的效果,并定量分析活性化合物对细胞内总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的含量的影响;使用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测活性化合物对细胞内脂质代谢相关基因表达水平的影响,探究活性化合物发挥降脂作用的潜在分子机制。结果表明:(1)野菠萝咖啡酰奎宁酸类天然产物中绿原酸、异绿原酸A、3,4,5-三咖啡酰奎宁酸可显著抑制油酸诱导的HepG2细胞内脂质堆积;(2)浓度为1-10μmol·L-1时,绿原酸、异绿原酸A及3,4,5-三咖啡酰奎宁酸均无细胞毒性;(3)油红O染色后测光密度值及显微镜下观察发现,绿原酸、异绿原酸A及3,4,5-三咖啡酰奎宁酸在10μmol·L-1浓度下可显著降低由油酸诱导的HepG2细胞内脂质堆积;同时三种活性化合物还能够显著降低HepG2细胞内TG含量,而此浓度的绿原酸还可以显著降低细胞内的TC含量,因此以上三种咖啡酰奎宁酸类化合物是野菠萝提取物中发挥降脂作用的主要活性化合物;(4)实时荧光定量PCR结果表明,绿原酸、异绿原酸A能显著上调脂质氧化相关基因PPAR-α、PPAR-γ及其下游靶基因CPT-1、ACOX1的表达,同时,绿原酸、异绿原酸A、3,4,5-三咖啡酰奎宁酸可以显著下调脂质合成相关基因SREBP-1c、SREBP-2及其下游靶基因HMGR、ACC、FAS的表达。综上所述,野菠萝提取物中的绿原酸、异绿原酸A、3,4,5-三咖啡酰奎宁酸可以显著抑制山油酸诱导的HepG2细胞中脂质堆积,其抑制细胞内脂质堆积的作用可能是通过上调脂质氧化相关基因、同时下调脂合成相关基因的表达水平实现的。