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目的：PI3K/Akt在肿瘤细胞生长、增殖及血管新生等生物学行为中起重要作用。然而,其与肿瘤血管生成拟态形成的关系不明确。本研究拟初步探索PI3K与肺癌血管生成拟态的关系。方法：收集我院2007年1月-2008年4月肺腺癌手术病例47例及良性肺疾病组织11例,免疫组化法检测各组织中Akt、p-Akt的表达；CD31免疫组织化学及PAS组织化学双重染色法检测各肺癌组织中是否存在血管生成拟态；统计学分析p-Akt阳性表达与肺癌中VM现象的关系；结果：肺癌组织中Akt表达阳性率为80.8%(38/47),p-Akt表达阳性率为76.5%(36/47),肺良性病组织中Akt及p-Akt表达阳性率分别为27.3%(3/11)和18.2%(2/11),肺癌组织中Akt及p-Akt的阳性表达率显著高于良性肺疾病组织(p<0.05)；在47例肺癌患者中,6例患者肺癌组织中存在VM现象(6/47,12.7%),其中p-Akt均高表达,在p-Akt表达阴性的11例肺癌患者中,有VM现象的为0%(0/11)。结论：PI3K/Akt途径可能在肺癌血管生成拟态形成起作用,但尚需进一步实验探索其在VM形成中的作用机制。目的：目前研究表明PI3K在肿瘤血管新生中起重要作用。然而,其具体作用机制尚不明确。本研究拟通过体外实验探讨PI3K特异性抑制剂LY294002对人血管内皮细胞株EA.hy926形成新生血管过程的影响；通过动物实验初步探讨其对人肺腺癌细胞株A549裸鼠移植瘤中新生血管形成的影响及其机制。方法：免疫荧光细胞化学法检测ⅤⅢ因子抗原,以鉴定内皮细胞株EA.hy926可否用于下一步实验；MTT法检测PI3K特异性抑制剂LY294002对EA.hy926细胞增殖抑制率及对粘附能力的影响；Western blot法检测LY294002对EA.hy926细胞表达p-Akt的影响；考马斯亮蓝R250染色法检测LY294002对EA.hy926细胞形态及骨架的影响；Transwell小室实验检测LY294002对EA.hy926细胞迁移能力的影响；管道形成实验检测LY294002对EA.hy926细胞管道形成能力的影响；构建人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤,以LY294002干预,隔日测量肿瘤体积,绘制裸鼠移植瘤生长曲线；免疫组织化学法检测移植瘤组织微血管密度、p-Akt及VEGF表达水平。结果：EA.hy926细胞中ⅤⅢ因子抗原阳性,证实该细胞为血管内皮细胞株,可用于下一步实验；PI3K特异性抑制剂LY294002呈剂量依赖性抑制EA.hy926细胞增殖和粘附能力,其对EA.hy926细胞24h的IC50值为38.4±4.9μmol/L,48h的IC50值为24.6±5.1μmol/L,72h的IC50值为16±3.7μmol/L;LY294002干预24h后,EA.hy926细胞p-Akt表达下调、骨架破坏、迁移能力及管道形成能力显著下降；LY294002显著抑制人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤生长；LY294002干预组微血管密度、p-Akt及VEGF表达水平均显著低于对照组(p<0.05)。结论：PI3K特异性抑制剂LY294002可能通过抑制血管内皮细胞增殖和粘附能力、破坏细胞骨架、抑制其迁移及成管能力、下调肺癌细胞表达p-Akt及VEGF,从而抑制肺癌裸鼠移植瘤中血管新生,抑制肿瘤生长。目的：第一部分实验结果表明PI3K可能在肺癌血管生成拟态形成中起重要作用。但是其具体机制不明确。本研究拟通过体内、外实验初步探讨PI3K特异性抑制剂LY294002对人肺腺癌细胞株A549形成血管生成拟态过程的影响及其机制。方法：MTT法检测PI3K特异性抑制剂LY294002对人肺腺癌细胞株A549增殖的影响；western blot检测LY294002对A549细胞表达p-Akt的影响,以了解LY294002对PI3K活性的影响；考马斯亮蓝R250染色法检测LY294002对A549细胞形态及骨架的影响；划痕实验检测LY294002对A549细胞迁移能力的影响；Transwell小室侵袭实验检测LY294002对A549细胞侵袭能力的影响；管道形成实验检测LY294002对A549细胞管道形成能力的影响；明胶酶谱实验检测LY294002对A549细胞MMP-2/9活性的影响；RT-PCR及western blot检测LY294002对A549细胞表达VEGF的影响；构建人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤,以LY294002干预,测量裸鼠移植瘤生长曲线；免疫组化法检测移植瘤组织中p-Akt及VEGF表达；免疫组织化学及PAS组织化学双重染色法检测裸鼠移植瘤组织中血管生成拟态现象。结果：PI3K特异性抑制剂LY294002呈剂量依赖性抑制人肺腺癌细胞株A549增殖能力,其对A549细胞24h的IC50值为62.5±6.9μmol/L,48h的IC50值为38.0±4.1μmol/L,72h的IC50值为23.3±4.7μmol/L;LY294002干预24h后,p-Akt表达下降,A549细胞骨架破坏,迁移能力、侵袭能力、管道形成能力下降,明胶酶谱实验示MMP-2/9活性下降；RT-PCR及western blot示LY294002干预后A549细胞VEGF表达显著下降；干预组裸鼠移植瘤生长速度显著减慢,血管生成拟态管道数量、p-Akt及VEGF表达水平均显著低于对照组(p<0.05)。结论：PI3K特异性抑制剂LY294002可能通过抑制A549增殖能力、破坏细胞骨架、抑制其迁移、侵袭及成管能力、抑制MMP-2/9活性、抑制肺癌细胞表达VEGF,从而抑制肺癌血管生成拟态形成,抑制肿瘤生长。目的：第三部分实验结果表明PI3K抑制剂可能通过下调肺癌细胞中VEGF表达从而抑制肺癌血管生成拟态形成,VEGF为促血管新生最强的细胞因子,本研究拟初步探索VEGF与肺癌形成血管生成拟态之间的关系,以了解VEGF能否作为抗血管新生和血管生成拟态的共同靶点。方法：在三维细胞培养系统中观察LO2细胞、HepG2细胞、SMMC-7721细胞、A549细胞形成血管生成拟态现象的能力；RT-PCR及western blot法检测四种细胞株中VEGF表达情况；构建pcDNA3.0-VEGF165b真核表达质粒,用Lipofectamine2000转染A549细胞,构建稳定转染空质粒的人肺腺癌细胞株A549A和稳定转染VEGF165b真核表达质粒的细胞株A549B；RT-PCR、免疫荧光化学法检测转染后A549细胞中VEGF165和VEGF 165b在mRNA和蛋白表达水平变化；将转染后的A549细胞三维细胞培养,观察两种细胞株体外形成管道能力的差异。结果：在三维细胞培养系统中,HepG2细胞、A549细胞有形成血管生成拟态现象的能力,而LO2细胞、SMMC-7721细胞没有形成血管生成拟态现象的能力；RT-PCR及western blot结果均显示LO2细胞、HepG2细胞、A549细胞中VEGF165、VEGF121表达明显较SMMC-7721细胞高(P<0.05)；RT-PCR及免疫荧光细胞化学均示稳定转染空质粒的人肺腺癌细胞株A549A和稳定转染VEGF165b真核表达质粒的A549细胞株A549B构建成功；转染空质粒及VEGF165b真核表达质粒后的A549细胞三维细胞培养,形成血管生成拟态现象的能力与空白对照组无明显区别。结论：VEGF低表达的细胞株没有形成血管生成拟态现象的能力,VEGF高表达的细胞株不一定能形成血管生成拟态现象,而能形成血管生成拟态现象的细胞株VEGF表达高,表明VEGF与血管生成拟态形成能力有一定关系；而VEGF 165对A549细胞形成血管生成拟态的能力无明显影响,故而,尚需进一步研究探索VEGF亚型中对VM形成有关键影响的分子。