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转录因子在植物生长发育的各个阶段都发挥着重要的作用,并参与多种激素的信号转导。苹果MdHB1是HD-Zip转录因子家族的一员。本试验以课题组前期得到的MdHB1过表达烟草‘NC89’植株和病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)处理的‘澳洲青萍’(Granny Smith)果实为试验材料,从转录水平和激素水平研究了MdHB1对于赤霉素合成代谢的影响;在这过程中,我们在大肠杆菌中原核表达得到了MdHB1的融合蛋白,以此为抗原通过新西兰兔的免疫制备了MdHB1的多克隆抗体。试验结果如下: (1)将实验室前期克隆的MdHB1基因分别连接到pGEX-6p-1和pET-28a(+)两个表达载体上,转化大肠杆菌感受态BL21(DE3),在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下,表达得到了带有GST和6×His标签的融合蛋白(分别命名为MdHB1-GST和MdHB1-His6)。Ni-NTA纯化的融合蛋白MdHB1-His6为抗原经成年兔免疫以制备多克隆抗体;经间距酶联免疫法(ELASA)检测,所得抗体效价较高;蛋白质免疫印迹试验(Western blot)说明所制备多克隆抗体不仅能从菌体总蛋白中特异性识别MdHB1,也能从苹果幼叶总蛋白中成功检测MdHB1蛋白;表明本实验所得多克隆抗体能够用于进一步的蛋白研究,深入挖掘MdHB1在植物体内的功能。 (2)Western blot试验说明,赤霉素合成抑制剂多效唑(Paclobutrazol,PAC)处理的‘澳洲青萍’果皮中MdHB1含量显著上升,其对于赤霉素(GA)处理可能是负响应。MdHB1过表达烟草叶片中,NtGA20ox1、NtGA2ox1表达量下调,NtGA3ox1上调,且都达到了显著水平;病毒诱导MdHB1基因沉默后,苹果果肉中MdGA3ox的转录水平显著上升,高效液相色谱(HPLC)测定的GA3含量也显著高于对照组。综合以上结果,推测MdHB1参与了赤霉素的信号转导。