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目的:观察小鼠多倍体胚胎植入后发育形态学特征,结合囊胚基因表达分析,阐述小鼠多倍体胚胎的发育潜能,为小鼠多倍体胚胎的发育和研究提供实验数据,也为重复基因组的基因表达水平提供最为基础和重要的数据。 方法:制作多倍体胚胎并进行胚胎移植,收集E5.5-8.5的着床胚,通过切片观察多倍体E5.5-8.5着床胚的胚层分化形态结构特征;使用4个独立软件程序geNorm、NormFinder、比较delta-Ct法和RefFinder分析内参基因的稳定性,选出在二倍体与多倍体植入前胚胎中通用的最稳定的内参基因,并分析和阐述多倍体中候选内参基因的表达模式。应用Real-time qPCR技术检测多倍体胚胎与聚合多倍体胚胎囊胚期发育相关基因的表达,包括Oct4、Nanog、Sox2、Gata4、Gata6、 Cdx2、Wnt9a和Fgf4。 结果: 1、观察着床胚的发育形态学以及对应发育时程,ICR小鼠4N胚胎未能发育至E9.5,且发育时程明显较二倍体延迟,六倍体胚胎植入后发育停滞于E5.5。ICR小鼠聚合四倍体E5.5-8.5的发育情况基本与二倍体一致,未见发育延迟现象。聚合六倍体E5.5-8.5发育时程延迟。 2、除了1-cell阶段,大多数内参基因在多倍体中表达水平比二倍体胚胎中高。但增加程度与倍性不成比例;在囊胚期不同倍性的胚胎之间内参基因表达差异不显著。 3、在所有样本组中,最稳定的内参基因是Ubc、Ppia和Pgk1,最不稳定的是Tbp、Gapdh和β-actin。 4、检测发育关键基因在小鼠多倍体和聚合多倍体囊胚中的表达差异,结果显示在多倍体中Oct4、Nano和Fgf4变化不显著;Sox2、Gata4和Gata6达下降,Cdx和Wnt9a表达上升;聚合多倍体胚胎中Sox2、Gata6和Fgf4表达回升,Wnt9a表达回降,表达水平更接近于二倍体。而Cdx2表达继续上升,表明多倍体胚胎可能更倾向于滋养外胚层方向发育。 结论: 1、ICR小鼠多倍体胚胎发育明显异常,四倍体发育时程延迟,六倍体发育停滞于E5.5时期;E5.5-8.5 ICR小鼠聚合后四倍体发育形态与时程基本与二倍体一致,聚合六倍体发育时程延迟。 2、通用于植入前小鼠二倍体和多倍体胚胎的最稳定参考基因是Ubc、Ppia和Pgk1。 3、胚胎聚合改善了小鼠多倍体囊胚关键发育基因的表达,如Sox2、Gata6、Wnt9a和Fgf4等。