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牛瑟氏泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫（Theileria sergenti）寄生于牛体内引起的一种血液原虫病。近些年，瑟氏泰勒虫病的发生呈上升趋势，给相关国家的畜牧业带来了较大的经济损失，引起了国内外兽医界的广泛关注。本试验的目的是以p33融合蛋白为抗原，建立检测牛瑟氏泰勒虫抗体的Dot-ELISA方法，从而为牛瑟氏泰勒虫病的临床诊断提供一种更为简便，且特异、敏感的诊断方法。 本试验将诱导表达后的大肠杆菌经过超声波裂解后，用2mol/L的尿素对包涵体进行了初步洗涤，洗涤后的包涵体在8mol/L的尿素中溶解效果很好。用梯度透析法对以包涵体形式存在的目的蛋白进行复性，使目的蛋白重新恢复生物活性，然后以复性后的p33融合蛋白为抗原建立检测牛瑟氏泰勒虫抗体的Dot-ELISA诊断方法。 本试验对Dot-ELISA的反应条件进行了优化，确定了最适工作条件。结果表明，试验流程中最适抗原包被浓度在62.5μg/mL～15.625μg/mL之间，最适血清稀释度为1:100，最适酶标羊抗牛IgG的稀释度为1:2000；经阻断试验、交叉反应试验和重复性试验，表明建立的Dot-ELISA方法是特异的，且重复性好；对80份珲春市采集的牛血清分别进行Dot-ELISA和常规ELISA检测，结果表明Dot-ELISA检测出阳性率为15.0％，常规ELISA检测的阳性率为16.3%，阳性符合率为92.3%，阴性符合率为100%，总符合率为98.8%。 本试验在国内首次应用中国株T.sergenti-p33融合蛋白为抗原，成功建立了牛瑟氏泰勒虫 Dot-ELISA诊断方法，所建立的Dot-ELISA法除了具有ELISA的高度特异性和敏感性之外，还具有快速、简便、适合现场操作等优点，为牛瑟氏泰勒虫病诊断提供了一种可靠的检测手段。