阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的免疫治疗和免疫病理学机制是近年来的关注热点,临床研究提示AD高风险因素APOEε4等位基因与免疫治疗的疗效及不良反应的发生有关;感染单纯疱疹病毒I型的APOEε4基因携带者的AD发病率较高。但以上研究机制并不清楚。本课题拟检测不同月龄雌雄APOE-TR小鼠大脑IgG的改变及HSV-1诱导SH-SY5Y细胞表达Aβ,主要包含以下两部分:第一部分,年龄、性别及APOEε4基因共同作用AD相关易感区域的IgG表达。本研究以3、10月龄雌雄对半的APOE-TR小鼠为研究对象,首先采用DAB染色和ELISA技术检测APOE-TR小鼠大脑及小脑内IgG分布与水平;其次采用双色免疫荧光技术对IgG进行细胞定位;流式检测外周血中CD19+B细胞百分比及Western Blot技术检测大脑内不同区域CD19表达。DAB染色结果显示在3、10月龄雌雄APOE-TR小鼠的大脑的不同脑区及小脑均可观察到IgG免疫阳性细胞染色。雌性组中,10月龄APOE4-TR小鼠IgG免疫染色强度弱于同龄APOE3-TR小鼠,尤其以海马区域最为明显,而在丘脑区域无明显的差别。雄性组无明显差别。ELISA结果显示,雌性组IgG水平要高于雄性组,在雌性组中,10月龄APOE4-TR小鼠内嗅皮层、新大脑皮层、海马IgG水平明显低于同龄APOE3-TR小鼠;且与3月龄APOE3-TR小鼠相比,10月龄APOE3-TR小鼠内嗅皮层、新大脑皮层、海马及小脑区明显升高。而雄性组,IgG含量在年龄和基因型中均无明显统计学差异。双染共定位发现,IgG免疫阳性细胞主要为小胶质细胞和少量丘脑背侧内核处神经元。APOE-TR小鼠皮层内均见散在分布的少量Aβ阳性染色,尤以10月龄APOE4-TR小鼠为明显。此外,Western Blot结果显示在海马区域,APOE4-TR小鼠CD19表达明显低于APOE3-TR小鼠,其他脑区无统计学差异,血浆中APOE-TR小鼠IgG含量无明显差异。综上所述,10月龄雌性APOE4-TR小鼠内嗅皮层、新大脑皮层、海马IgG水平明显减少,并伴明显的脑内Aβ积聚,年龄、性别及APOE基因三者共同作用于大脑中IgG改变,可能通过作用于小胶质细胞对Aβ的吞噬清除参与AD的发生。第二部分,探讨HSV-1对于SH-SY5Y细胞Aβ表达的影响。10MOI HSV-1感染SH-SY5Y细胞12 h,24 h后,双色免疫荧光检测SH-SY5Y细胞感染HSV-1后的Aβ和APOE表达;Western Blot方法检测HSV-1 g C protein、APP、MME、APOE、GSK3β、p-GSK3β表达。SH-SY5Y细胞在感染HSV-1 12 h后,神经突触开始减少,突起回缩,感染时间延长,细胞开始聚集,呈圆形,甚至开始脱落。感染12 h后,与正常组相比,Aβ表达明显增加,而APOE蛋白表达则无明显改变。感染24 h后,Aβ较正常组虽有明显增加,但表达明显弱于12 h,而APOE蛋白表达则明显增加。免疫印迹分析显示,与对照组相比较,HSV-1感染12 h后,APP蛋白水平有所降低,GSK-3β总蛋白水平明显增加,且磷酸化活性增强,MME蛋白水平明显增加。在感染24 h时,与对照组相比只有APOE蛋白表达增强,MME蛋白表达降低。我们证实,HSV-1感染SH-SY5Y细胞后,细胞内、外Aβ均增加,感染初期可能通过促进APP代谢增加Aβ产生,感染后期主要减少Aβ降解过程,增加的APOE蛋白与HSV-1竞争细胞表面受体,影响Aβ表达。这些结果可以为进一步阐明HSV-1与神经元相互作用及影响AD发展进程提供证据。