古日古木单、复方对四氯化碳致大鼠急性肝损伤的保护作用研究

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目的:研究古日古木单、复方对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)致大鼠急性肝损伤的保护作用,并研讨药物对凋亡通路相关因子的影响。  方法:Wistar雄性大鼠150只随机分为9组:正常对照组、水飞蓟宾阳性对照组及古日古木单、复方的高、低剂量组各10只,古日古木单、复方中剂量组及CCl4急性肝损伤模型组各30只。造模方式为水飞蓟宾按照0.1g/kg浓度灌胃给药,古日古木单、复方的高、中、低剂量组分别以1g/kg、0.5g/kg、0.25g/kg浓度灌胃给药,持续给药8天,第8天给药后1h,除空白对照组外各组大鼠一次性腹腔注射1mL/kg CCl4花生油溶液致急性肝损伤模型,空白组注射同剂量的花生油。处死前24h禁食不禁水,分别于CCl4染毒后24h、48h、72h处死动物。取血,分离血清测谷丙转氨酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate transaminase,AST)、碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)和总蛋白(Total Protein,TP)。肝脏组织分别作HE染色进行病理组织学检查、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力测定、流式细胞术检测肝细胞凋亡,提取肝组织蛋白,运用Western Blot法测定凋亡相关蛋白的Bax、Bcl-2及Caspase-3表达。  结果:1.急性损伤后24h,模型组血清ALT、AST、ALP及肝脏MDA活性明显升高,GSH、SOD水平显著下降(P<0.01);古日古木复方各组均能明显降低血清ALT水平(P<0.01),古日古木单方各组也能使血清ALT水平降低(P<0.05),古日古木单、复方各组均能显著减少血清AST水平(P<0.05),复方高剂量和单方低剂量能明显降低ALP水平(P<0.05),古日古木复方各组及单方低剂量组能显著提高GSH水平(P<0.01),复方高剂量组能够显著的降低肝组织中MDA活性(P<0.01),单方低剂量组也使MDA活性明显下降(P<0.05),古日古木复方中剂量组在损伤后48h仍能降低ALT、AST、MDA水平(P<0.05)从而促进肝损伤修复,损伤后72h各组均恢复近正常血清或肝脏酶水平;2.急性损伤后24h,模型组中央静脉周围多数融合坏死,易见凋亡小体,伴混合性炎细胞浸润,窦细胞反应活跃,此病变为重度小叶性肝炎,而古日古木单、复方均能不同程度地减少凋亡小体和小坏死灶,在损伤后48h模型组损伤程度减轻,古日古木单、复方促进了模型组恢复,使小叶结构清晰,损伤后72h各组均恢复至近正常细胞结构状态,整体来看,单复方均有保护作用;3.古日古木复方剂量组和单方中、低剂量组均能明显减少CCl4引起的肝细胞凋亡(P<0.05),作用与古日古木复方剂量有呈正相关的趋势,与古日古木单方剂量有呈负相关的趋势;4.古日古木复方各组均能明显降低Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2Associated X Protein,Bax)表达量(P<0.05),其中高、低剂量组还能显著提高和Bcl-2/Bax表达量(P<0.05),高剂量组也能使Bcl-2表达量明显增高(P<0.05),古日古木单方中、低剂量组能够明显增加B细胞淋巴瘤基因-2(B cell lymphoma2,Bcl-2)表达量(P<0.05),其中低剂量组还能够明显使Bcl-2/Bax表达量提高(P<0.05),古日古木单、复方组均能够不同程度地降低模型组中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)(17kD)的异常升高。  结论:古日古木单、复方对CCl4致大鼠急性肝损伤后24h均有保护作用,并在损伤48h后促进肝脏的修复,这与其清除自由基、抗氧化作用及通过对凋亡相关通路因子的调节以减少细胞凋亡的作用有关。
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