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【目的】探讨miR-205在胶质母细胞瘤恶性转化过程中的生物学功能和分子机制,为胶质母细胞瘤的临床诊断、治疗和预后评估提供新的生物学标志物和新的分子治疗靶点。【方法】第一部分:1、通过实时荧光定量PCR检测4种胶质瘤细胞株(U251、A172、U-118和U-87)和正常胶质细胞株HEB中miR-205的表达水平。2、miR-205模拟物瞬时转染入U-87细胞,实时荧光定量PCR检测转染后细胞中miR-205的表达水平。3、MTT法检测过表达miR-205的U-87细胞增殖能力的改变。4、流式细胞术检测过表达mi R-205的U-87细胞凋亡水平的改变。5、划痕实验检测过表达miR-205的U-87细胞迁移能力的改变。6、Transwell实验检测过表达miR-205的U-87细胞侵袭能力的改变。第二部分:1、采用microRNA靶基因预测软件预测胶质母细胞瘤中miR-205的候选靶基因。2、采用实时荧光定量PCR和Western Blot法检测转染不同浓度miR-205模拟物后U-87细胞中候选靶基因FRAT1 mRNA和蛋白水平表达情况。3、采用荧光素酶双报告基因系统检测miR-205对候选靶基因FRAT1的3’UTR区的调控作用,最终确定miR-205的直接靶基因。第三部分:1、构建胶质母细胞瘤移植动物模型,检测miR-205对胶质母细胞瘤生长的影响。2、采用免疫组织化学染色技术检测肿瘤增殖因子Ki67蛋白、肿瘤侵袭因子Vimentin蛋白和靶基因FRAT1的表达水平。3、采用TUNEL细胞凋亡实验检测移植瘤细胞凋亡水平的改变。【结果】第一部分:1、miR-205在4种胶质瘤细胞株中的表达水平明显低于正常胶质细胞株,其中在U-87细胞株中的表达水平最低。2、miR-205模拟物能够显著提升U-87细胞中miR-205的表达水平,转染后细胞增殖能力减弱、凋亡水平上升、细胞的迁移和侵袭能力下降。第二部分:1、通过microRNA靶基因预测软件确认mi R-205的候选靶基为FRAT1。2、随着miR-205模拟物转染浓度的升高,候选靶基因FRAT1 mRNA和蛋白水平逐渐发生下降。3、miR-205能够抑制野生型荧光素酶活性,但对突变型荧光素酶活性没有影响。第三部分:1、miR-205能够抑制胶质母细胞移植瘤的生长。2、miR-205激动剂处理组移植瘤中Ki67、Vimentin和靶基因FRAT1蛋白表达低于对照组,但肿瘤凋亡水平高于对照组。【结论】在胶质母细胞瘤的发展过程中,miR-205表达发生减少,导致下游靶基因FRAT1表达水平上升,胶质母细胞瘤获得更强的恶性表型,肿瘤增殖能力增强、凋亡水平降低、迁移和侵袭能力提升,最终促使胶质母细胞瘤的演进和恶性转化。本研究阐明了胶质母细胞瘤恶性转化的分子机制,为肿瘤的分子靶向治疗提供了理论基础。