旋毛虫病是由于人类摄入含有旋毛虫的肉类而感染的危害严重的人兽共患病,该病不仅对人和动物的身体健康产生巨大的伤害,同时对畜牧养殖和肉类进出口也造成了极大的经济损失。基于旋毛虫肌幼虫ES抗原建立的ELISA检测方法是世界动物卫生组织推荐使用的血清学检测方法,但ES抗原制备困难。因此,研究出一种制备工艺便捷、特异性和灵敏度高的旋毛虫病检测方法,对保障社会的公共卫生安全、维护肉类进出口贸易的稳定、减少畜牧业的损失有着重要意义。丝氨酸蛋白酶抑制因子（Serine proteinase inhibitor,Serpin）是一类结构相对保守的蛋白质超家族,它能抑制丝氨酸蛋白酶在凝血、补体激活和炎症中的功能,且在多种生物系统中发挥着重要的生理作用。目前,已有研究证实丝氨酸蛋白酶抑制因子在旋毛虫发育的各个阶段均有转录表达,但是以丝氨酸蛋白酶抑制因子WM5作为检测抗原,建立猪旋毛虫感染的诊断方法却没有系统的报道。首先,本实验室前期通过免疫学方法对旋毛虫肌幼虫时期的cDNA表达文库进行筛选时,发现了高丰度且具有强反应原性的丝氨酸蛋白酶抑制因子WM5抗原。本研究利用已构建好的WM5原核表达系统诱导表达WM5重组蛋白,并对其进行纯化。感染旋毛虫的猪阳性血清可以特异性识别WM5重组蛋白,表明WM5重组蛋白的免疫反应性较强,是建立猪旋毛虫感染检测方法的候选抗原。随后制备多克隆抗体并对其进行鉴定,结果表明制备的兔抗WM5血清的抗体效价为1:160 000,且可以特异性识别肌幼虫虫体粗提物（crude worm extract,CWE）、肌幼虫ES产物和WM5重组蛋白,由此推测WM5可能是一种分泌性蛋白。其次,建立了基于丝氨酸蛋白酶抑制因子WM5的猪旋毛虫间接ELISA检测方法,并对该方法的各步反应条件进行优化。通过对205份未感染旋毛虫病的猪阴性血清的检测及计算,确定该方法的cut-off值为0.207,且与华支睾吸虫、囊虫、蛔虫等阳性血清无交叉反应。该方法的批内变异系数和批间变异系数均小于10%,且与基于旋毛虫肌幼虫期ES抗原建立的ELISA检测方法对比,检测效果相似。由于WM5重组蛋白的生产工艺更适合应用于工业化生产,故此检测方法避免了旋毛虫ES抗原在制备过程中成本昂贵等问题,所以该方法更适用于大规模的推广及应用。最后,我们将纯化后的WM5重组蛋白免疫小鼠,获得了两株杂交瘤细胞株M2A12和M3F11。单克隆抗体鉴定结果表明:两株单克隆抗体均可识别旋毛虫肌幼虫期ES产物和虫体抗原中的WM5,且两株单克隆抗体均属于IgG1亚类。对旋毛虫不同发育时期虫体进行WM5的免疫荧光定位,在肌幼虫的杆状体和各时期虫体的表皮发现明显的荧光信号,表明WM5是由杆状体分泌到体外发挥作用。随后对两株单克隆抗体的B细胞表位进行定位,确定了两株单克隆抗体可结合的表位均位于²⁷⁷EALKKLGIEDLF²⁸⁸氨基酸序列上。制备的单克隆抗体和多克隆抗体对检测旋毛虫多宿主的感染和建立血清学检测方法有着重要意义。