抗金黄色葡萄球菌海洋微生物的分离、发酵及产物的初步纯化

来源 :华南热带农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:youngpansy
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自从Flemming发现青霉素以来,相继已有350多种抗生素应用于临床,使许多传染性疾病得到了控制。但随着抗生素的广泛使用和细菌耐药性的出现,人们必须不断寻找新药。 陆生生物资源曾是抗生素的主要来源。但随着研究的不断深入,从陆生生物资源中发现新的抗生素的难度越来越大,几率越来越低。海洋具有独特的环境,使海洋生物具有生物物种多样性、基因多样性、代谢机制的多样性和代谢产物的多样性,被誉为天然药物的资源“宝库”,海洋已成为世界各国开发新型药物的热点领域。 从海南及周边19个地区采集的127个海洋环境样品中,分离得纯培养菌株1,451个,其中细菌656株(45.21%),放线菌419株(28.88%),真菌376株(25.91%)。采用琼脂扩散法抗菌模型对1,451个分离菌株的发酵产物进行抗菌活性物质筛选,结果发现对金黄色葡萄球菌有强抑菌作用的菌株13株。 HSLⅠ-306是从海南红树林泥中分离到的一株放线菌,经琼脂扩散法抗菌模型筛选表明对金黄色葡萄球菌有强烈抑制作用,复筛抑菌活性仍不丢失。HSL Ⅰ-306菌株经营养、形态特性初步鉴定为游动放线菌科螺孢菌属。 对HSLⅠ-306菌株的发酵条件和培养基组成进行了研究,结果发现,HSL Ⅰ-306菌株在菌龄48hr,发酵时间为96hr,发酵培养基pH6.5~7.2时活性最强;3%~7%盐浓度更适于活性物质的产生;正交实验培养条件的优化结果为pH6.5、振荡频率300rpm、培养温度为28℃、发酵培养基配方为蔗糖2%、黄豆粉1.5%、酵母浸粉0.15%、CaCO3O.05%、甘油0.20%。 对HSLⅠ-306菌株产生的抗菌活性产物的理化性质进行了初步探讨。研究表明,该活性物质具有较强的热稳定性,pH≤9的条件下能稳定存在,但pH≥12的强碱性条件下活性物质的抗菌活性几近丧失;活性物质易溶于氯仿、酸性水、不溶于乙酸乙酯、石油醚、碱性水;薄层层析显示活性物质在紫外光下能发蓝绿色荧光等特点;由捷克八溶剂系统纸层析鉴定该抗菌活性物质不属于四大类抗生素,可能为一新的抗菌活性物质。 中国热带农业科学院、华南热带农业大学2003届硕士研究生 采用有机剂抽提法、酸碱抽提法、大孔吸附树脂柱层析和阳离子交换树脂柱层析等方法对HSL-306菌株发酵产物进行了初步分离纯化。
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