南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)斐济病毒属(Fijivirus),由介体昆虫白背飞虱以持久增殖型方式传播,已经成为引起我国南方水稻主产区重要病害的病毒之一。灰飞虱也可以获毒,但是由于SRBSDV不能突破灰飞虱中肠释放屏障,导致不能够传毒。而且在不受组织屏障制约的灰飞虱培养细胞内,SRBSDV侵染率和增殖速度也均显著低于白背飞虱培养细胞。因此我们推测导致灰飞虱无法传播SRBSDV的主要原因是灰飞虱体内存在RNA干扰(RNA interference,RNAi)抗病毒途径,该途径抑制病毒的侵染增殖,致使病毒积累量无法达到突破中肠释放屏障的阈值。本研究以SRBSDV为对象,通过体外合成与RNAi途径相关基因argonaute 1(Ago1)、argonaute 2(Ago2)、Dicer 1(DCL1)、Dicer 2(DCL2)、systemic RNA interference defective-1(SID-1)和 Piwi 相对应的双链 RNA(double-stranded RNA,dsRNA),利用灰飞虱体外培养细胞技术和dsRNA诱导的RNAi技术,筛选灰飞虱RNAi通路中调控SRBSDV侵染的关键基因。免疫荧光实验发现在培养细胞水平分别干扰DCL2和Ago2基因后,SRBSDV在灰飞虱培养细胞的侵染率上升,而干扰RNAi途径其他基因后,SRBSDV在灰飞虱培养细胞侵染率无明显变化;RT-qPCR实验进一步证明,干扰DCL2和Ago2后,SRBSDV在灰飞虱培养细胞的积累量均明显提高。因此,本研究明确了灰飞虱体内存在的RNAi抗病毒免疫通路可以调控SRBSDV在灰飞虱细胞内的复制增殖,影响灰飞虱培养细胞内的病毒积累量,并且确定了该通路中调控SRBSDV侵染的关键因子是DCL2和Ago2。该研究有助于研究病毒与介体昆虫互作关系,为进一步分析灰飞虱体内防御SRBSDV侵染的RNAi机制,解析介体昆虫免疫系统是如何应对病毒侵染奠定基础,有助于为阻断SRBSDV高效侵染介体来防治病毒病的发生提供新的思路和方向。