【摘 要】
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该研究由流产胎儿脑组织获取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcript-polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法扩增获取人的NT-6基因;并将其重组到载体质粒pBK-CM
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该研究由流产胎儿脑组织获取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcript-polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法扩增获取人的NT-6基因;并将其重组到载体质粒pBK-CMV中,构建NT-6基因表达载体,在原核细胞进行了表达.在此基础上,我们将NT-6成熟肽编码区的基因进行亚克隆,构建了含有该基因的融合表达载体pGEX-NT-6,诱导表达后获得纯化的NT-6成熟肽片段.利用离体培养的乳鼠海马神经元和大鼠面运动神经元逆行溃变的动物模型,对NT-6成熟肽片段的功能在细胞水平及整体动物水平进行了研究.实验结果表明,我们成功地克隆了人源性NT-6基因;氨基酸序列比较和三维结构分析显示,人源性NT-6具有该家族蛋白结构的固有特性.含有NT-6成熟肽片段基因的融合表达载体,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导的条件下,表达了NT-6成熟肽片段.经分离纯化的NT-6成熟肽,可以促进离体培养海马细胞的存活,对抗由于面神经损伤引起的面运动神经元的逆行溃变.该项研究不仅有助于拓展人们对NT这一类重要小分子蛋白质的神经生物学特性的认识,同时也为探讨临床上退行性神经疾病及神经损伤的防治措施提供了重要的理论依据.
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