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子宫内膜异位症是常见的妇科疑难疾病之一,是指有活力的子宫内膜组织(腺体和间质)在正常子宫腔面以外的部位出现和增殖的疾病,长期以来,这种性质良性而行为却类似恶性的疾病一直困惑着临床医生。本课题着重探讨桂苓消异方治疗该病的理论基础,并建立人子宫内膜间质细胞的体外纯化培养方法,并观测药物血清对体外培养的间质细胞形态以及上清液分泌IL-6,IL-8的影响,初步研究桂苓消异方对子宫内膜异位症的影响及其作用机理。一、桂苓消异方治疗子宫内膜异位症的理论探讨祖国医学无子宫内膜异位症病名,其主要症状与中医的痛经,癥瘕,不孕等病症密切相关。因肾主生殖的功能异常,加之经期、产后生活不节等,导致冲任损伤及胞宫的藏泻功能异常,而发生本症,肾虚多为发病之根本,血瘀是重要的致病因素和病理表现。治疗当从温肾化瘀着手。桂枝茯苓丸最初出于《金匮要略》,为治疗胎漏之剂,仲景本意用于妊娠之后癥积害胎,胎元不固者,若用于临床消癥散积,有病重药轻之嫌,一须增强活血化瘀药力,二须结合辨证加减运用。导师在原方基础上去甘缓之蜜,加仙灵脾以温肾阳、血竭粉以增强祛瘀散结的力量,组成桂苓消异方用于临床取得较好疗效。这为本课题以温肾化瘀中药进行子宫内膜异位症的体外实验研究,奠定了临床和理论基础。二、初步建立人子宫内膜间质细胞的体外纯化培养方法收集2007年4月至2008年10月在扬州市第一人民医院和扬州市中医院妇产科接受手术治疗子宫内膜异位症的患者的在位子宫内膜,原代分离培养间质细胞并传代,利用显微镜观察细胞生长增殖情况,免疫组化法鉴定细胞纯度。结果显示,以筛网分离法为主,体外纯化的人子宫内膜间质细胞生长增殖状况良好,实验观察期间均为单一的间质细胞,细胞传代4-5代,成活25-30天。免疫组化显示所得的间质细胞纯度>95%。证实在本实验条件下,体外分离纯化的子宫内膜间质细胞具备良好的增殖能力,且内异症与非内异症内膜均可分离培养成功(P>0.05)内膜间质细胞的取材时期对细胞成活率以及增殖能力有影响(P<0.05),为揭示子宫内膜异位症的发病机制以及药效学研究建立良好的实验平台。三、桂苓消异方对间质细胞形态以及培养上清液分泌IL-6,IL-8的影响制备桂苓消异方药物血清,用不同药物剂量干预子宫内膜异位症患者的在位子宫内膜间质细胞,倒置显微镜下观察形态变化,并收集药物作用24h、48h、72h三个时间段的细胞培养上清液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法定量检测其分泌的细胞因子IL-6,IL-8。通过形态学观察,初步确定了桂苓消异方药物血清对人子宫内膜间质细胞的有效抑制,且呈浓度依赖性;桂苓消异方能明显降低子宫内膜细胞培养液中细胞因子IL-6,IL-8的分泌。推测调节免疫、抑制子宫内膜局部炎症反应、减轻盆腔粘连,降低异位细胞的侵袭力及自身增殖能力,抑制新生血管的形成可能是桂苓消异方控制子宫内膜异位发生发展的效应之一。