MicroRNA在AFB1致大鼠急性毒中的作用研究

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黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFT)主要由黄曲霉(Aspergillus flavel)等产生,AFT是真菌的次级代谢产物,属有毒物质。目前,已发现包括黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)在内的二十多种黄曲霉毒素,而黄曲霉毒素B1是其中含量较多且毒性较强的毒素之一。AFB1广泛存在于储存不当的食物或动物饲料中,它不仅对植物、微生物有伤害作用,对哺乳动物也有毒害作用,甚至可诱使癌症发生,如肝癌等。它对哺乳动物产生的毒害作用由剂量和作用时间共同决定,作用的主要靶器官是肝脏。AFB1的长期作用,可能引起癌症的发生;它的短期作用则可损伤细胞、抑制细胞增殖或引起细胞凋亡。近来,人们发现微小RNA(microRNA,miRNA)是一类进化保守的非编码小RNA(non-coding smallRNA),它不仅在机体地生长、发育、分化和繁殖等正常代谢过程起作用,也在肿瘤的发生和转移等病变过程中扮演着重要的角色。我们试图研究microRNA在AFB1致大鼠急性毒中的作用。本研究将6只F344大鼠随机分为两组,每组各3只。实验组和对照组分别用AFB1和生理盐水,进行灌胃处理一次。在实验组中,AFB1的浓度为1.5mg/kg。3d后观察发现,实验组的大鼠进食减少、行动变缓、身体时而颤抖、尿液发黄、体重变轻。大鼠经乙醚麻醉后拉颈处死,收集血液,离心得到血清并进行肝功能测定。发现实验组大鼠血液中的乳酸脱氢酶、总胆红素、碱性磷酸酶、丙氨酸转氨酶和谷草转氨酶均显著上升,说明AFB1对大鼠有毒害作用。提取大鼠的肝脏总RNA,并进行小RNA高通量测序。通过小RNA高通量测序,我们发现有116个miRNAs发生显著性差异性表达,其中32个上调表达,84个下调表达。利用Stem-loop RT-qPCR验证小RNA测序结果,发现miR-34a发生显著性上调表达,与测序结果一致。最后,我们将mimic miR-34a转染到RH35细胞,可抑制其生长。说明miR-34a可能在AFB1致毒通路中起作用。
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