随着生命科学研究的不断深入,对各种生命现象发生的机制,特别是对细胞内蛋白质-蛋白质间的相互作用的研究变得尤为重要。在过去十几年来,由于蛋白质组学得到迅速发展,蛋白质间的相互作用成为蛋白质组学的重要内容。荧光共振能量转移(fluorescenceresonance energy transfer,FRET)是近来发展的一项新技术,自 1948年Fosrter等人提出荧光共振能量转移理论后,FRET技术被广泛应用于生物大分子结构,免疫分析以及定量分析等方面的研究。植物中存在一种由胞外域、跨膜域和胞内的蛋白激酶三部分组成的跨膜蛋白激酶,该蛋白为胞外特异性配基的受体。水稻类受体激酶OsCR4属于此受体激酶家族。实验研究的前期工作是对OsCR4进行亚细胞定位分析和其体外的活性分析后得出,OsCR4可能和其胞外的某些信号物质共同完成细胞分化的过程,并用酵母双杂交的方法筛选到与OsCR4相互作用的其细胞外的信号分子,命名为OsCIP1。本文利用FRET技术探究二者的相互作用。白蛋白存在于血浆中,是一种载体蛋白,可以与许多化合物结合。而很多药物进入体内后,通过血浆的贮存和转运后才能到达受体部位,从而发挥药效。东莨菪内酯和秦皮甲素都是普遍存在于多种中药中的一种香豆素类化合物,具有抗炎、抗菌、镇痛、抗过敏等多种作用。已经有文献报道用蛋白内源荧光测定药物小分子和蛋白质的相互作用,本文利用FRET技术探究它们之间的直接相互作用的信息。因此本文尝试以荧光能量转移技术为实验研究的理论依据,初步探究了蛋白质-蛋白质以及小分子-蛋白质之间的相互作用。具体结论如下:1、实验首先纯化已经标记有组氨酸标签的两种蛋白,纯化蛋白的原理为:因Ni2+可以和组氨酸配位.,将含有组氨酸标签的重组蛋白过镍柱,吸附这些含组氨酸的蛋白质,从而达到分离纯化的目的。分别纯化两种蛋白OsCR4和OsCIP1之后,以异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记了水稻类受体激酶(OsCR4),四甲基异硫氰酸罗丹明(Tetramethylrhodamine-5-isothiocyanate,5-TRITC)标记其胞外蛋白(OsCIP 1),荧光共振能量转移技术为理论基础,在生理pH条件下测定了两种蛋白在体外的相互作用。2、以异硫氰酸荧光素(FITC)标记牛血清白蛋白,荧光共振能量转移技术为理论基础,分别测定了牛血清白蛋白与两种香豆素类中药东莨菪内酯和秦皮甲素的相互作用。实验在二者的摩尔比是1:1的情况下,测定了不同酸度下的两种物质的相互作用,以及同一酸度下,两种物质在不同摩尔比下的相互作用,实验结果表明,随着两种物质的摩尔比和pH的不断增大,FRET的值基本是呈增大的趋势,说明两种物质有相互作用且二者结合达到饱和平台。在测定牛血清白蛋白和秦皮甲素的相互作用时,同样的实验条件下测定的结果和以上结果基本上是一致的。