【摘 要】
：
[目的]本课题以柯萨奇病毒A组10型（CoxsackieVirus A10,CV-A10）为研究对象,探究其在16HBE和RD细胞上是否能够诱导细胞发生自噬,并在此基础上利用构建的CV-A10感染的ICR乳鼠模型,进一步探讨CV-A10引起的自噬在体外和体内对病毒复制的影响。[方法]在细胞层面,分别采用蛋白印迹法、免疫荧光法、透射电镜方法检测CV-A10感染16HBE和RD细胞后,自噬标记物LC3
【基金项目】
：
国家自然科学基金项目（31700153）；
论文部分内容阅读
[目的]本课题以柯萨奇病毒A组10型（CoxsackieVirus A10,CV-A10）为研究对象,探究其在16HBE和RD细胞上是否能够诱导细胞发生自噬,并在此基础上利用构建的CV-A10感染的ICR乳鼠模型,进一步探讨CV-A10引起的自噬在体外和体内对病毒复制的影响。[方法]在细胞层面,分别采用蛋白印迹法、免疫荧光法、透射电镜方法检测CV-A10感染16HBE和RD细胞后,自噬标记物LC3蛋白表达、定位、自噬相关蛋白Beclin-1、P62的表达水平及自噬小体的出现情况以探究CV-A10感染的16HBE和RD细胞是否能够引发自噬。加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine,3-MA）后,蛋白印迹法检测LC3蛋白表达情况,探究CV-A10引起的自噬是否被抑制。另外,通过微量细胞病变法、实时荧光定量PCR、蛋白印迹法分别检测3-MA处理组和未处理组的病毒滴度变化、病毒载量变化和病毒VP1蛋白表达变化情况以探究自噬对病毒复制的影响。在动物层面,构建CV-A10感染ICR乳鼠模型,HE染色观察各组织的病理损伤情况,免疫荧光法观察病毒在各组织中分布情况,实时荧光定量PCR检测乳鼠脑组织CV-A10病毒载量变化情况。[结果]CV-A10感染16HBE和RD细胞,LC3-Ⅱ蛋白表达量高于对照组。同时,RFP-GFP-LC3质粒分别转染入16HBE和RD细胞,CV-A10感染后可观察到红绿荧光聚集现象。通过透射电镜观察到可见自噬小体。自噬相关蛋白Beclin1的表达水平随感染时间增加而增加,P62蛋白随感染时间增加呈下降趋势。自噬抑制剂3-MA处理后,LC3-Ⅱ蛋白表达量减少,能够抑制CV-A10引起的细胞自噬,且其病毒滴度、病毒RNA载量、病毒VP1蛋白表达均低于未处理组。在以1日龄ICR乳鼠为感染对象建立的CV-A10感染模型上,3-MA处理组乳鼠生存率、体重显著高于未处理组,临床表现得分低于未处理组;HE染色观察到3-MA处理组乳鼠的脑、心、肺、肠和肌肉组织病理损伤比病毒组轻。免疫荧光结果显示小鼠各组织中病毒颗粒少于未处理组。实时荧光定量PCR检测结果显示感染病毒3、5、8天时,3-MA处理组乳鼠脑组织病毒载量低于未处理组。[结论]CV-A10能够诱导16HBE和RD细胞发生自噬,P62、Beclin1参与自噬过程。自噬抑制剂3-MA能够抑制CV-A10诱导的细胞自噬,并且能够抑制病毒在细胞上复制。在小鼠体内,3-MA同样可以抑制CV-A10在乳鼠体内的复制,改善病理损伤,提高小鼠生存率。
其他文献
[目的]探讨基于 ESA（European Society of Anaesthesiology）指南的非药物干预对防治老年髋部骨折患者术后谵妄（POD,Postoperative Delirium）的应用效果,观察该干预方法对老年髋部骨折患者术后并发症发生率、疼痛情况、患者自理能力、营养情况以及患者髋关节功能情况的影响,最后得出该干预方法对此类患者术后谵妄发生率和谵妄持续时间的影响效果。[方法]
[目 的]探索SAA、PCT、CRP、白细胞总数4项感染相关生物标志物在儿童下呼吸道感染性疾病中的临床应用价值。[方 法]通过回顾性分析2019年01月31日至2021年01月31日于玉溪市儿童医院接受住院治疗的360例下呼吸道感染（lower respiratory tract infection,LRTI）性疾病患儿的临床资料,排除临床表现相似而并非下呼吸道感染、病程超过3天、入院前已经过抗感
[目的]通过收集听神经瘤术前影像学检查及患者临床资料,明确上述因素与肿瘤切除程度及术后并发症发生率的关系,探讨影响听神经瘤手术预后的相关危险因素,为提高患者手术预后及改善生活质量提供理论支持。[方法]收集2018年9月到2021年1月昆明医科大学第一附属医院神经外一科126位住院手术病人的术前影像学检查及患者临床资料,所有患者术前均根据house-backmann面神经功能分级标准评估有无面瘫,并
[目 的]探讨基于互联网平台的4C延续性护理模式对肠造口患者出院后生活质量、自我护理能力及造口并发症发生率的影响,通过组建多学科团队,制定4C延续性护理干预计划,明确本研究对患者院外康复的应用价值及意义,为今后4C延续性护理在临床上的应用提供指导。[方 法]抽取2019年12月-2020年8月昆明医科大学第三附属医院（云南省肿瘤医院）结直肠外科、胃与小肠外科96例肠造口患者,根据入院时间的先后顺序
[目的]艾滋病,又称获得性免疫缺陷综合征（Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS）,它形成的原因是人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）攻击人的免疫细胞使人的免疫屏障受损。艾滋病严重威胁着人类健康和社会经济的发展,还是一个严重威胁人类公共健康的跨世纪难题。据初步统计,从截至到2019年10月底,我国累计确定HIV
[目的]手足口病（Hand,foot,and mouth disease,HFMD）是儿童常见急性传染性疾病,多发生于5岁以下儿童,与肠道病毒感染有关。普通HFMD病例多具有自限性,但重症病例病情凶险,进展快,死亡率高。肠道病毒71型（Enterovirus 71,EV71）是重症手足口病的主要致病病原体,可引发HFMD重症,导致患者出现病毒性脑膜炎、脊髓灰质样综合征和神经源性肺水肿等严重的神经系
[目的]探讨人工智能肺结节量化参数评估CT上表现为GGN（pGGN和mGGN）的早期肺腺癌不同浸润程度的临床价值。[方法]回顾性收集2018年3月至2020年12月就诊于本院胸外科或老年胸外科患者,经胸部HRCT检出GGN,并进行亚肺叶/肺段/肺叶切除,手术病理提示早期肺腺癌。最终纳入114例pGGN患者（AIS:29例,MIA:39例,IAC:46例）,其中女性、男性比例为79/35,平均年龄为
[目的]胞壁酰二肽（Muramyl Dipeptide,MDP）是一种由N-乙酰胞壁酸与L-丙氨酸-D-异谷酰胺的短氨基酸链连接而成的具有免疫刺激功能的短肽。人们对MDP及其衍生物的结构修饰进行了广泛的研究,以期有效地提高其佐剂活性,增强疫苗的免疫应答。本实验探讨MDP用作佐剂在新冠亚单位重组蛋白疫苗的效应,以期在体内提高新冠疫苗的免疫反应。[方法]所用动物品系为Bal B/C小鼠,雌性,6至8周
[目 的]通过TGF-β1诱导膀胱癌细胞上皮-间质转化同时获得肿瘤干细胞样特性。建立基于膀胱癌干细胞的转录组学、定量蛋白质组学和非靶向代谢组学,多组学分析以寻找膀胱癌干细胞代谢重编程过程中涉及的具体通路以及相关基因,为膀胱癌干细胞代谢重编程的机制研究提供线索。[方 法]通过TGF-β1诱导膀胱癌细胞使其获得肿瘤干细胞样特性,同时通过形态观察、RT-qPCR和流式细胞术验证TGF-β1作用不同时间的
[目的]探究对颅底骨质有破坏的鼻咽癌患者,在放疗过程中通过核磁共振评价放疗疗效,对其进行个体化同步加量放疗,与常规放疗的鼻咽癌患者相比,在局部控制率、无远处转移生存率、无疾病进展生存率、总生存率和毒副反应方面是否有差异。[方法]随机选取2017年5月至2018年10月昆明医科大学第三附属医院经病理组织学确诊,有颅底骨质破坏,无远处转移的首诊鼻咽癌患者37例,在放疗第15次时评价放疗疗效,根据REC