【摘 要】
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目的:（1）建立HPLC分析方法同时测定止得咳颗粒中龙脷叶-射干药对中5种成分（芒果苷、山柰酚-3-O-龙胆二糖苷、射干苷、鸢尾黄素、次野鸢尾黄素）含量的方法,明确配伍前后各成分的含量变化。（2）以药效学为指标,研究止得咳颗粒不同拆方及不同配伍比例的配伍关系。（3）研究止得咳颗粒止咳药效及中枢性和外周性止咳机制。（4）研究止得咳颗粒入血成分,并且通过鉴别止得咳颗粒入血成分,探讨止得咳颗粒的药效物质
【基金项目】
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广西创新驱动发展专项资金资助项目（桂科AA17202046）；
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目的:（1）建立HPLC分析方法同时测定止得咳颗粒中龙脷叶-射干药对中5种成分（芒果苷、山柰酚-3-O-龙胆二糖苷、射干苷、鸢尾黄素、次野鸢尾黄素）含量的方法,明确配伍前后各成分的含量变化。（2）以药效学为指标,研究止得咳颗粒不同拆方及不同配伍比例的配伍关系。（3）研究止得咳颗粒止咳药效及中枢性和外周性止咳机制。（4）研究止得咳颗粒入血成分,并且通过鉴别止得咳颗粒入血成分,探讨止得咳颗粒的药效物质基础。方法:（1）采用HPLC法进行分析,测定龙脷叶-射干药对配伍前后芒果苷、山柰酚-3-O-龙胆二糖苷、射干苷、鸢尾黄素、次野鸢尾黄素含量变化。（2）运用拆方法将止得咳颗粒分为君药组、两两配伍组及全方组;运用正交设计法,将止得咳颗粒中起主要药效作用的三味药材龙脷叶、射干、黄芩按L9（3~4）正交表配伍分为9组。均采用小鼠氨水引咳实验、小鼠气管酚红试验及二甲苯致小鼠耳肿胀为模型,综合评分法筛选最佳配伍配比。（3）采用小鼠氨水引咳模型,记录咳嗽潜伏期及咳嗽次数后,通过酶联免疫分析法（ELISA法）测定不同组分小鼠脑组织中5-羟色胺（5-HT,5-hydroxytryptamine）、5-吲哚乙酸（5-HIAA,hydroxydindoleacetic）、去甲肾上腺素（NE,norepinephrine）及小鼠肺组织和血清中P物质（SP,substance p）的含量。（4）采用HPLC法和超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF/MS）技术,对大鼠空白及给药血清中原型成分及代谢成分进行初步鉴定。结果:（1）芒果苷、山柰酚-3-O-龙胆二糖苷、射干苷、鸢尾黄素、次野鸢尾黄素质量浓度分别在4.464×10-3～0.13392、2.24×10-3～4.48×10-2、1.92×10-2～0.576、3.192×10-3～0.9576、1.334×10-2～0.4002 mg·m L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.99986～1.00000）,平均加样回收率在99.82%～102.15%之间（RSD＜3%,n=6）。龙脷叶-射干药对中的芒果苷、山柰酚-3-O-龙胆二糖苷、射干苷、鸢尾黄素、次野鸢尾黄素均有增加,且在龙脷叶-射干配伍比例为1:1时,药对中成分含量最高。（2）与模型组相比,各配伍组均有止咳、祛痰及抗炎药理作用,各因素影响药效的主次关系为:射干＞黄芩＞龙脷叶。（3）止得咳颗粒能够延长氨水引咳后小鼠的咳嗽潜伏期,减少小鼠的咳嗽次数,增加小鼠脑组织中5-羟色胺（5-HT）、5-吲哚乙酸（5-HIAA）、去甲肾上腺素（NE）的含量,抑制小鼠血清及肺组织中P物质（SP）的表达。（4）从含药血清中初步鉴定出3个药源性成分,其中有1个为止得咳颗粒的原型成分。结论:（1）本试验首次建立了同时测定龙脷叶-射干药对中5个成分含量的分析方法,综合评价龙脷叶-射干药对及其制剂内在质量,结合配伍前后各成分含量的变化,可为龙脷叶-射干药对的临床配伍应用以及配伍对其化学成分溶出、对药效的影响及配伍机制等研究提供科学依据。（2）通过对止得咳颗粒的拆方组及不同配伍比例的止咳、化痰及抗炎药效研究,确定止得咳颗粒的最佳配伍配比是止得咳颗粒原配伍剂量:龙脷叶111 g,射干111 g,黄芩74 g,其余七味药按照原配比剂量,这为止得咳颗粒中龙脷叶、射干为君药,黄芩为臣药的组方原则提供了佐证。（3）止得咳颗粒中枢性止咳机制可能与5-羟色胺（5-HT）的释放有关;止得咳颗粒外周性止咳机制可能与抑制P物质（SP）的表达有关。（4）初步鉴定了止得咳颗粒的入血成分为柠檬酸、L-酪氨酸、次野鸢尾黄素,其中次野鸢尾黄素以止得咳颗粒原型成分入血。
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