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黄体是一个暂时的内分泌腺体,由成熟卵泡排卵后形成。黄体的形成、发育和退化对家畜的繁殖至关重要。细胞和细胞基质的粘附是维持组织结构稳定性的基本要求。Claudin-5是一种内皮特异性紧密连接蛋白,已有研究表明Claudin-5在卵巢中主要定位于血管。STAT3是信号转导与转录激活因子家族成员之一,可被多种细胞因子激活,参与细胞的增殖、分化与凋亡等活动。本论文主要采用放射免疫法(RIA)、免疫组织化学(IHC)、Real time-PCR和蛋白免疫印迹(WB)等方法,研究Claudin-5及STAT3相关信号分子在大鼠和猪卵巢黄体形成与退化过程中的表达模式,为进一步研究Claudin-5与STAT3参与调控卵巢黄体功能的分子机制提供试验依据。主要内容如下:1.Claudin-5及其相关信号分子在大鼠卵巢黄体退化过程中的表达模式研究为了研究Claudin-5及其相关信号分子在假孕大鼠中的表达模式,采用PMSG/hCG联合处理建立大鼠假孕模型。在假孕D7注射一次或两次(间隔24 h)PGF诱导黄体退化。分别在一次PGF处理0、2、4、8、24 h和两次PGF处理2h和24 h采集血清和卵巢组织。采用放射免疫法检测血清孕酮水平,采用蛋白免疫印迹、Real time-PCR和免疫组织化学技术检测Claudin-5及磷化酸化的STAT3(p-STAT3)、Akt(p-Akt)、ERK1/2(p-ERK)和P38(p-P38)在卵巢组织中的表达。结果发现,血清孕酮(P4)水平在PGF处理后显著降低(P<0.05)。Claudin-5 mRNA的表达在一次PGF处理4 h和8 h显著下降,PGF加强处理后Claudin-5 mRNA水平在2 h即显著下降;Claudin-5蛋白水平在一次PGF处理4 h显著降低(P<0.05)。p-STAT3在一次PGF处理4 h和两次PGF处理后2h显著增加(P<0.05),p-ERK在两次PGF处理后2h显著增加(P<0.05),p-Akt在一次PGF处理后4 h显著下降(P<0.05),PGF处理并不改变P38 MAPK的磷酸化水平(P>0.05)。免疫组织化学结果显示,PGF处理后Claudin-5在黄体类固醇细胞的细胞质和细胞核以及血管中均有表达,而p-STAT3则均匀表达在黄体类固醇生成细胞的细胞质。总之,PGF处理后假孕大鼠黄体Claudin-5的表达量降低,额外的PGF处理进一步降低了 Claudin-5 mRNA水平,且增强了 ERK及STAT3的磷酸化水平,为进一步研究Claudin-5、ERK及STAT3调控卵巢黄体退化提供试验依据。2.STAT3及相关信号分子在猪卵巢黄体形成与退化过程中的表达研究为了研究STAT3及相关信号分子在猪卵巢黄体发育与退化过程中的表达,采集卵泡期卵巢(F)、早期黄体(E)、中期黄体(M)和晚期黄体(L),应用蛋白免疫印迹技术(WB)检测p-STAT3、STAT3、p-JAK2、JAK2及LC3-B的表达,应用免疫组织化学技术(IHC)检测STAT3在卵巢中的细胞定位。WB结果显示,p-STAT3在晚期黄体表达量极显著升高(P<0.01);p-JAK2在早期黄体表达量较高(P<0.05);JAK2与STAT3的表达量在整个卵巢周期无显著差异(P>0.05);LC3-B在早期及中期黄体表达量较高(P<0.01)。IHC结果显示,STAT3主要定位在猪卵巢卵泡的颗粒细胞、膜细胞和黄体的类固醇生成细胞中。以上结果表明,猪黄体细胞发育与退化过程可能受多种信号通路的协同调控,为进一步研究黄体形成和退化的分子机制提供试验依据。