论文部分内容阅读
研究背景: 蛇床子素（Osthole,Ost）是近年研究较多的中药单体成分之一,现代药理学研究发现Ost具有多方面的药理作用,尤其在促进学习记忆、抗衰老方面应用较多。 AD是一种神经系统进行性、退行性疾病,老年斑的核心组分Aβ与AD的发生明显相关。Aβ可诱导活化周围的Ⅰ型星形胶质细胞（AS）过表达β-APP,生成过多的可溶性Aβ,同时,激活的AS分泌的多种细胞因子及胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的过表达均对神经元（Neu）具有毒性作用,因而激活的AS在AD的发病过程中起着重要作用,研究AS与Neu的交互作用成为探讨神经系统疾病发病机制的热点。 NF-κB是一种快反应转录因子,它作为一种多极性基因调控蛋白,是炎症反应、细胞免疫及凋亡等过程的核心调节环节。细胞处于静息状态时,NF-κB与其抑制蛋白IκB结合成复合物在胞浆与胞核之间穿梭。当细胞受到外界刺激时,起始信号传递反应通过激活抑制蛋白激酶IKK引起IκB磷酸化。IκB磷酸化是NF-κB信号传导活化最关键也是最普遍的途径,此途径反应十分迅速,5min即可使NF-κB的活性水平达到峰值。过度活化的NF-κB能导致胶质细胞释放炎症因子、增加载脂蛋白E（ApoE）的表达和氧化应激反应,以致产生细胞凋亡,从而加速AD的发生、发展及其恶化。 研究目的: 本课题以AS与海马Neu混合培养为靶标,运用CCK-8法检测Aβ25-35所致AD细胞模型的毒性作用,并以AD星形胶质细胞模型为靶标,研究Ost对Aβ25-35诱导的NF-κB活化表达抑制是否与其上调IκBα的表达有关。 方法: 建立AS与海马Neu混合培养方法,用倒置显微镜进行形态学观察,结合CCK-8检测细胞活力的方法,选择Aβ25-35造模的浓度和时间;并以Ost预作用于AD星形胶质细胞模型,选择具有较好保护作用的浓度和时间;用激光共聚焦显微镜和Leica Confocal图像分析软件检测分析FITC/PI双重标记的NF-κB和IκBα在细胞内的激活程度。数据以（?）±s表示,用SPSS11.0进行统计分析。 结果: 1 混合培养细胞中,AS胞体较大,外形扁平,呈星形,胞质较丰富,细胞核圆形或卵圆形,常偏于胞体一侧,细胞突起丰富,符合AS形态特点;海马Neu存活率很高、生长迅速,胞体小,胞突丰富而细长,胞核呈圆形或卵圆形,居于胞体中间。 2 Aβ以剂量依赖方式对混合培养的细胞呈现一种“营养作用”,40uM Aβ作用于混合培养细胞24h和48h后具有明显的促增殖作用;检测结果采用两因素方差分析方法,结果发现Aβ作用时间的变化对细胞的增殖并无明显影响。