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目的:糖脂代谢病中糖尿病心肌细胞损伤严重危害人类健康,至今仍未有有效的防治方法。中药复方贞术调脂胶囊(FTZ)在临床实践中发现其具有改善降糖、改善胰岛素抵抗、改善糖尿病冠心病患者症状的作用,但机制不明确。本实验通过高浓度的葡萄糖诱导建立糖尿病心肌细胞损伤体外模型,着重从氧化应激角度探讨FTZ对高糖诱导心肌损伤的作用及机制。方法:1、模型的建立:用DMEM低糖培养基(5.5mmol/L)培养H9C2心肌细胞,用不同梯度浓度的葡萄糖培养基处理细胞,应用MTT实验检测细胞存活率,据此初步确定模型组所需高糖浓度。将H9C2心肌细胞分为正常组、高糖组(33mmol/L),甘露糖组(渗透压对照),应用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况和细胞内活性氧簇(ROS)的生成情况;试剂盒检测丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)等氧化应激相关指标,据此确定高糖诱导的心肌细胞损伤模型的建立。2、FTZ的作用及机制:培养H9C2心肌细胞,分为5组,即正常组(5.5mmol/L)、高糖组(33mmol/L)、FTZ低剂量组(高糖+0.2ug/m L FTZ)、FTZ中剂量组(高糖+1ug/m L FTZ)、FTZ高剂量组(高糖+5ug/m L FTZ),检测细胞凋亡确定细胞损伤程度,WB检测凋亡相关蛋白酶caspase3的蛋白表达情况;相应的氧化应激试剂盒检测MDA、CAT氧化应激相关指标的活性;PCR检测NOX4、NOX2及炎症因子等mRNA的表达,WB检测PKC-NOX通路上PKC、NOX4、NOX2、i NOS、NF-k B等蛋白的表达。结果:1、与正常组相比,高糖组心肌细胞内ROS的生成、LDH释放、MDA活性显著升高,炎症因子mRNA的表达升高;高糖组心肌细胞GSH-Px、SOD及CAT的活性显著降低,凋亡率显著升高。2、与模型组相比,FTZ可降低心肌细胞ROS的生成,升高抗氧化物质CAT的活性;减少心肌细胞过氧化物质MDA的含量和LDH的释放及细胞凋亡率。3、与正常组相比,高糖组心肌细胞氧化应激相关的NOX2、i NOS蛋白表达及PKCβ2、NF-k B蛋白磷酸化升高;炎症因子IL-1、IL-6、MCP1、TNFαmRNA的表达升高。与模型组相比,FTZ可下调心肌细胞氧化应激相关的NOX2、i NOS蛋白表达及PKCβ2、NF-Kb蛋白磷酸化,下调炎症因子IL-1、IL-6、MCP1、TNFαmRNA的表达。结论:1、高浓度的葡萄糖可导致心肌损伤。2、FTZ可减轻高浓度的葡萄糖可导致的心肌细胞的损伤。3、机制上,FTZ通过抑制氧化应激和炎症来改善心肌细胞损伤。