论文部分内容阅读
繁殖性能是家畜的重要经济性状,繁殖力低是限制现代畜牧业发展的原因之一。卵泡刺激素受体(Follicle Stimulating Hormone Receptor, FSHR)和亲吻素(KISS1)基因对家畜的产仔数有显著影响。卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone,FSH)在促进和维持性腺发育和生殖功能中发挥重要作用,但是其生理作用需通过分布于细胞膜表面的卵泡刺激素受体(Follicle stimulating hormone receptor, FSHR)介导。KISS1基因在下丘脑-垂体-性腺轴系统中起到中枢节点作用。KISS1基因的翻译产物kisspeptins刺激GnRH分泌,激活性腺轴,影响黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)和FSH的分泌,进而对哺乳动物生殖内分泌起调控作用。KISS1及其受体G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor 54,GPR54)基因还是调节动物初情期的关键基因。实验室前期通过分别构建小鼠卵巢颗粒细胞特异表达的猪FSHR基因(pFSHR)真核载体AMH-pFSHR和小鼠脑部特异表达猪KISS1基因(pKISS1)的真核载体pCaMKIIa-KISS1,通过显微注射的方法制备了转猪FSHR和KISS1基因小鼠。本文针对F1-F5代小鼠阳性率、pFSHR和pKISS1基因在小鼠体内的表达情况、以及对雌性小鼠繁殖性能的影响进行研究,实验结果如下：1.转猪FSHR基因小鼠：F1-F5代转基因小鼠平均每窝产仔数均高于野生型小鼠,F1和F3代的窝产仔数达到显著水平(P<0.05)在转基因小鼠卵巢中特异表达,心脏、肝脏、脾脏、肾脏、子宫及下丘脑中则未检测到其表达,而在转基因小鼠和野生型小鼠的卵巢都有mFSHR mRNA的表达。猪FSHR蛋白在转基因小鼠卵巢中有表达,其表达水平在阳性小鼠之间没有显著差异,与mRNA水平结果一致。FSH、LH、雌二醇、孕酮在间情期转基因小鼠和野生型小鼠中没有显著差异(P>0.05)。产仔数曲线表明转基因小鼠和野生型小鼠的窝产仔数随着年龄增加先升高,再降低；在同一鼠龄,转基因小鼠的产仔数比野生型小鼠多,且都在220日龄左右具有最大的窝产仔数,且达到显著水平(P<0.05)；转基因小鼠的生产间隔时间比野生型小鼠更短(P<0.05)。2.转猪KISS1基因小鼠： F1-F5代转基因小鼠平均每窝产仔数均高于野生型小鼠,而且F1和F2代的窝产仔数达到显著水平(分别为P<0.01和P<0.05)。pKISS1 mRNA在转基因小鼠下丘脑中有表达,其他组织中则未检测到其表达；在转基因小鼠和野生型小鼠的卵巢和下丘脑中都能检测到mKISS1 mRNA的表达。猪kisspeptin蛋白在转基因小鼠下丘脑中有表达。F4代转基因小鼠血清中FSH和雌二醇激素浓度显著高于野生型小鼠(P<0.05)。产仔数曲线表明：同一鼠龄转基因小鼠比野生型小鼠具有更多的产仔数,都在200日龄左右具有最大的窝产仔数,且生产间隔时间比野生型小鼠更短。F4代转猪KISS1基因小鼠后代提前进入初情期,卵巢重量显著增加(P<0.05)。