药用植物半枝莲的组织培养及多倍体诱导

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药用植物半枝莲(Scutellaria barbata D.Don)是一种应用范围广、使用量大和药效功能多的传统中药,近年研究表明还具有良好的抗肿瘤作用。诱导多倍体能够提高药用植物药用成分的报道屡见不鲜,这种方法切实可行。本文以此为理论依据,先建立半枝莲的离体快繁体系,秋水仙素处理茎尖诱导半枝莲多倍体植株并进行鉴定,最后测定已确定的多倍体株系的药用成分总黄酮含量。以半枝莲盆栽苗的茎尖为起始材料,用含2%有效氯的NaClO溶液消毒5min,转入MS基本培养基中生长获得无菌小苗。分别切取无菌小苗1cm长的茎尖、0.8cm长带腋芽的茎段和不带腋芽的茎段为组织培养的外植体。半枝莲的离体快繁体系建立:以1cm茎尖为外植体,用激素6-BA和IBA组合诱导丛生芽,MS+6-BA 0.5mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1诱导的丛生芽最多,增殖系数为6.5;以1cm茎尖为外植体,用激素6-BA和NAA组合诱导丛生芽,MS+6-BA 0.5mg·L-1+NAA 0mg·L-1诱导的丛生芽最多,增殖系数为6.1;以0.8cm带腋芽的茎段为外植体,MS+6-BA 0.5mg·L-1+NAA 0mg·L-1诱导的丛生芽最多,增殖系数为5.7;以0.8cm带腋芽的茎段为外植体横放在培养基上,MS+6-BA0.5mg·L-1+NAA 0mg·L-1诱导的丛生芽最多,增殖系数为4.8。故诱导丛生芽的最佳培养基为MS+6-BA 0.5mg·L-1+IBA 0.1mg·L-1。半枝莲愈伤的诱导:以叶片和茎段为外植体,在激素6-BA和NAA组合的培养基上诱导愈伤,均未成功。半枝莲多倍体的诱导鉴定:0.2%的秋水仙素浸泡茎尖3h诱导的多倍体最多,诱导率高达10%,存活率为25%。分别从半枝莲的形态特征和细胞学方面对对照和多倍体进行了比较,并利用流式细胞仪对4个株系进行了鉴定,均为多倍体嵌合体。测定其中3个半枝莲多倍体株系的药用成分总黄酮的含量,分别是1.88%、1.85%和1.69%,未处理的正常对照株系是1.67%;加样回收率为99.1%,相对标准差为3.56%。
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