背景随着上个世纪90年代初期Jacobs第一次开展腹腔镜结直肠切除术以来,因其具有创伤小、恢复快、术后瘢痕小等特点,并且伴随着微创相关手术器械如超声刀、氢气刀、腔内切割吻合器（Endo-GIA）等的出现,近10余年来腹腔镜结直肠癌手术已逐渐在全世界范围内得到广泛开展,是目前腹腔镜用于消化道肿瘤手术中较成熟的一种手术方式。但一系列关于二氧化碳气腹腹腔镜术后恶性肿瘤生长加快、易复发、术后病人远期生存率及如何预防等相关问题仍存在争议,其中尤以二氧化碳气腹对恶性肿瘤的影响备受大家的关注,并成为近十余年来的一个研究热点。一些研究者认为,恶性肿瘤的生长增殖和转移与二氧化碳或腹腔镜治疗无关、而是与肿瘤细胞自身的特点有关。但同时也有研究者提出了不同的看法,他们认为二氧化碳气腹对恶性肿瘤的生长增殖有影响。目前关于二氧化碳气腹促进恶性肿瘤生长、增殖的机制,国内外有关此类的报道多数集中在机体免疫方面、癌细胞局部微环境改变、气腹压力大小等外源性调控途径的研究,关于细胞增殖分裂的内源性调控途径方面的报道相对较少。本课题主要通过如下两部分的研究、探讨二氧化碳气腹条件下大肠癌CX1细胞体外生长增殖以及其细胞周期调控因子（CDK4和Cyclin D1）的表达情况,从细胞增殖分裂的内源性调控途径方面对二氧化碳气腹促进恶性肿瘤生长增殖的机制进行研究。第一部分CO₂气腹对人大肠癌细胞株CX1生长和增殖的影响【目的】通过本实验建立的模拟腹腔镜操作条件,观察大肠癌CX1细胞在二氧化碳作用不同时间下细胞本身生长、增殖能力的影响,研究二氧化碳气腹对大肠癌细胞体外生长、增殖的作用并探讨其相关机制。【方法】根据实际操作腹腔镜手术的环境,建立体外的二氧化碳气腹模型。以腹腔镜结直肠癌手术常用的气压15mmHg的二氧化碳气体,分别作用于培养的大肠癌CX1细胞2h和4h两个时间段,这类细胞作为实验组。以没有做处理的大肠癌CX1细胞为对照组。采用两种实验方法进行分析:（1）四甲基偶氮唑盐比色方法（MTT法）将经过处理的大肠癌CX1细胞分别继续培养1～5天,根据细胞的光吸收值测定其生长情况,同时绘制生长曲线;（2）流式细胞术（FCM）大肠癌CX1细胞处理方法同上,测定细胞周期后根据公式计算增殖指数。【结果】根据MTT法和FCM法所得到的数据:（1）实验组细胞培养的第1～5天时间内,大肠癌CX1细胞2小时组和4小时组的光吸收值均高于相应的对照组（P＜0.05）,且在第3～5天中,光吸收值更是明显高于对照组（P＜0.01）,（2）从生长曲线上看,实验组细胞生长曲线的幅度均高于相应的对照组,（3）实验组细胞培养的第1～5天时间内,其增殖指数均高于相应的对照组（P＜0.05）,（4）实验组处于增殖期的细胞比例均高于对照组（P＜0.05）。【结论】大肠癌CX1细胞经过15mmHg压力的二氧化碳气腹处理后,自身的生长增殖速度加快,且处于增殖期的细胞数目增多,以上表明二氧化碳气腹可以加快大肠癌CX1细胞的生长增殖。第二部分CO₂气腹对人大肠癌细胞株CX1中CDK4和CYCLIN D1的影响【目的】通过本实验建立的腹腔镜操作条件,二氧化碳气腹作用于大肠癌CX1细胞2小时和4小时两个不同时间段,研究其对细胞周期调控因子的影响,进一步探讨二氧化碳气腹对大肠癌细胞生长增殖的影响及发生机制。【方法】根据实际操作腹腔镜手术的环境,建立体外的二氧化碳气腹模型。以腹腔镜结直肠癌手术常用的气压15mmHg的二氧化碳气体,分别作用于培养的大肠癌CX1细胞2h和4h两个时间段,这类细胞作为实验组。以没有做处理的大肠癌CX1细胞为对照组。将实验组细胞继续培养1～5天,采用免疫细胞化学法检测细胞周期调控因子CDK4和Cyclin D1在大肠癌CX1细胞中表达情况。【结果】（1）大肠癌CX1细胞中的周期调控因子CDK4和Cyclin D1阳性表达明显;（2）在大肠癌CX1细胞培养的1～5天内,实验组细胞CDK4和Cyclin D1的平均阳性光密度值（OD）均高于相应的对照组（P＜0.01）。【结论】在经二氧化碳气腹处理的大肠癌CX1细胞中,其细胞周期调控因子CDK4和Cyalin D1表达增强。表明二氧化碳气腹对大肠癌细胞从内源性调控机制有促进生长增殖作用。