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研究背景：调节性T细胞(Treg)是近年来新发现的一群表型和功能特异的T细胞亚群，对免疫反应具有抑制效应，从而在肿瘤免疫、移植物耐受、自身免疫性疾病及机体自身免疫平衡方面均有重要作用，因此越来越受到关注。Treg细胞可分为自然性Treg细胞（nTreg细胞）和诱导性Treg细胞（iTreg细胞）两部分，目前认为CD4~+CD25~+Foxp3~+为Treg细胞的特征性表型。已有大量研究表明老年人外周血淋巴细胞中Treg细胞的比例要比青年人高，而老年肿瘤患者外周血Treg细胞的比例要比健康老年人高，但是体内增加的Treg细胞究竟是来源于胸腺还是外周，由于缺少区分的标志分子，至今尚未有文献报道。转录因子Helios是Ikaros转录因子家族的一员，最初克隆自小鼠的胸腺瘤系并被报道表达于未确定的一个T细胞亚群，随后有文献研究证明，Helios选择性表达于胸腺起源的Treg细胞，这样就为我们探讨老年人及老年肿瘤患者体内增加的Treg的来源提供了依据，并且为肿瘤的特异性免疫治疗提供了新的研究方向。目的：从CD4~+Foxp3~+Helios~+细胞占CD4~+Foxp3~+细胞的比例，Helios~+Foxp3~+细胞占CD4~+T细胞的百分比，Foxp3~+Helios-细胞占CD4~+T细胞的百分比等三个方面分析青年人、老年人及老年肺癌患者体内Treg中Helios的表达情况，以期为探讨老年人及老年肺癌患者体内增加的Treg的来源及老年肺癌的治疗开辟一条新的道路。构建Helios真核表达载体，为进一步研究Helios的功能提供基础。方法：1.外周血Treg中Helios的表达情况的检测方法：青年人、老年人、老年肺癌患者外周静脉血收集于肝素钠抗凝的真空采血管内，于4小时内完成抗体染色处理过程，利用流式细胞仪获取数据并分析结果，最终得出不同人群Treg细胞中Helios的表达情况。2.Helios真核表达载体的构建：针对Helios的CDS序列（编码区）设计引物，提取人细胞系总RNA，逆转录合成cDNA，PCR扩增Helios并进行T-A克隆后，酶切回收Heliso片段，连入PcDNA3.1真核表达载体，经测序验证，获得Helios真核表达载体。结果：1.健康青年人、健康老年人、老年肺癌患者外周血中CD25~+Foxp3~+细胞占CD4~+T细胞的百分比分别为(2.77±0.53)%、(3.82±0.61)%、(6.00±2.40)%；老年人明显高于青年人（P<0.05），老年肺癌患者明显高于健康老年人（P<0.01）。2.健康青年人、健康老年人、老年肺癌患者外周血中CD4~+Foxp3~+Helios~+细胞占CD4~+Foxp3~+细胞的比例分别为（47.67±4.53）%、（26.38±4.50）%、（16.76±4.13）%；老年人明显低于青年人（P<0.01），老年肺癌患者明显低于健康老年人（P<0.01）。3.健康青年人、健康老年人、老年肺癌患者外周血中Foxp3~+Helios~+细胞占CD4~+T细胞的百分比分别为（2.07±0.33）%、（1.37±0.46）%、（1.30±0.26）%；老年人明显低于青年人（P<0.01），老年肺癌患者和健康老年人之间没有明显差异（P>0.05）。4.健康青年人、健康老年人、老年肺癌患者外周血中Foxp3~+Helios-细胞占CD4~+T细胞的百分比（2.28±0.36）%、（3.78±0.83）%、（6.83±2.40）%；老年人明显高于青年人（P<0.01），老年肺癌患者明显高于健康老年人（P<0.01）。5.健康青年人、健康老年人和老年肺癌患者外周血中Foxp3-Helios~+细胞占CD4~+T细胞的百分比分别为（1.85±0.40）%、（0.43±0.28）%、（0.30±0.22）%；老年人明显低于青年人（P<0.01），老年肺癌患者和健康老年人之间没有明显差异（P>0.05）。6.老年肺癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者外周血CD4~+Foxp3~+Helios~+细胞占CD4~+Foxp3~+细胞的比例分别为（18.52±2.99）%、（18.57±3.05）%、（12.13±3.23）%；Ⅰ期、Ⅱ期肺癌患者之间没有明显的差异(P>0.05)，Ⅱ期肺癌患者明显高于Ⅲ期肺癌患者(P<0.01)。7.健康青年人、健康老年人、老年肺癌患者外周血CD4~+CD25highFoxp3~+Helios~+细胞占CD4~+CD25highFoxp3~+细胞的比例分别为分别为(45.56±7.24)%、(30.37±6.32)%、(20.38±7.42)%；青年人明显高于老年人(P<0.01)，健康老年人明显高于老年肺癌患者(P<0.01)。8.Helios PcDNA的CDS区成功克隆，并连入到真核表达载体PcDNA3.1。9.重组PcDNA3.1-Helios能够在293T细胞中正常表达。结论：1.相较于青年人，老年人体内Treg细胞增多，老年肺癌患者更甚，这可能是导致老年人的免疫衰老及老年肺癌患者的抗肿瘤免疫反应较弱的原因。2.相较于青年人，老年人及老年肺癌患者体内CD4~+Foxp3~+Helios~+Treg亚群细胞比例较低，而CD4~+Foxp3~+Helios-Treg亚群则明显高于青年人，提示老年人和老年肺癌患者体内增多的Treg细胞主要是T细胞在外周诱导转化而来，去除体内CD4~+Foxp3~+Helios-Treg可能对提高肿瘤细胞免疫治疗的效果具有重要的意义。3. Helios不仅仅表达于CD4~+Foxp3~+细胞亚群，也表达于CD4~+Fox3-细胞，但CD4~+Foxp3-T细胞中Helios的表达远低于CD4~+Foxp3~+细胞亚群，Helios在这两群细胞中的差异性表达的原因有待进一步研究。4.重组PcDNA3.1-Helios能够在293T细胞中正常表达，为今后进一步研究Helios的功能打下基础。