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目的：维生素D3参与免疫系统调节,与机体固有免疫有关,维生素D3具有抗氧化作用,但其在氧化应激中的作用机制尚不明确。本实验通过LPS诱导氧化应激与DNA损伤,并观察维生素D3对LPS诱导的氧化应激与DNA损伤的保护作用,并就其机制进行研究。方法：选用人B淋巴母细胞株,分为PBS对照组、LPS组、LPS+维生素D3组。采用ROS探针,用酶标仪和激光共聚焦显微镜检测细胞内ROS水平；采用单细胞电泳彗星实验(COMET SOP),用激光共聚焦显微镜检测DNA损伤；采用流式细胞仪检测和共聚焦免疫荧光显微镜,用Annexin v-FITC方法检测细胞凋亡；使用Edu增殖试剂盒和CCK8增殖试剂盒,检测细胞增殖。用免疫荧光结合Edu增殖检测方法观察增值细胞中NF-kB磷酸化和NF-kB表达；6、用免疫印迹方法检测NFkB磷酸化、NF-kB和TNF-α表达。结果：1、全波长分光光度仪(酶标仪)结果显示, LPS组ROS的OD值(0.1914±0.149)明显高于PBS对照组(0.0375±0.0021) (P<0.05),显示LPS能够诱导细胞ROS产生；LPS+维生素D3组其ROS的OD值(0.1031±0.0058)明显低于LPS组(0.1914±0.149)(P<0.05),显示LPS+维生素D3组能够明显的抑制LPS诱导细胞产生氧化应激；同时使用共聚焦荧光显微镜结果显示：LPS刺激组荧光强度值(64.82 ±4.43)明显高于PBS对照组(13.45±0.91)(P<0.05),显示LPS能够诱导细胞ROS产生；LPS+维生素D3组其荧光强度值为：(48.24±1.46)明显低于LPS刺激组组(64.82±4.43)(P<0.05),显示LPS+维生素D3刺激组能够明显的抑制LPS诱导细胞产生氧化应激； 2、单细胞电泳(彗星实验)检测受损细胞尾长,LPS刺激组细胞尾长值(943.41±96)明显高于对PBS对照组(98.52±43)(P<0.01),显示LPS能够诱导细胞DNA损伤；LPS+维生素D3刺激组细胞尾长值(286.43±52)明显低于LPS刺激组(943.41±96)(P<0.01)；显示LPS+维生素D3刺激组能够明显的抑制LPS诱导细胞DNA损伤；3、共聚焦荧光显微观察细胞凋亡显示：1ug/ml LPS刺激组细胞凋亡值(13 ±1.41421)与PBS对照组(9±1.41421)(P>0.05)无统计学意义；10ug/ml LPS刺激组细胞凋亡值(22.5±3.53553)与1ug/ml LPS刺激组(13±1.41421)(P>0.05)无统计学意义；PBS对照组细胞凋亡值(9±1.41421)与10ug/ml LPS刺激组凋亡值(22.5±3.53553)(P>0.05)无统计学意义；流式细胞仪检测细胞凋亡值显示： 1ug/ml LPS刺激组细胞凋亡值(30.3±6.237)与PBS对照组细胞凋亡值(20.3 ±2.45)(P>0.05)无统计学意义；10ug/ml LPS刺激组细胞凋亡值(23.3±3.151)与1ug/ml LPS刺激组细胞凋亡值(30.3±6.237)(P>0.05)无统计学意义；PBS对照组细胞凋亡值( 20.3 ± 2.45 )与10ug/ml LPS刺激组细胞凋亡值(23.3±3.151)(P>0.05)无统计学意义；4、共聚焦荧光显微镜观察(Edu染色法)细胞增殖显示：LPS刺激组细胞增殖比(79.51±10.60)明显高于PBS对照组细胞增殖比(9.34±1.41)(P<0.05)显示LPS能够促进细胞增殖；LPS+维生素D3刺激组细胞增殖比(48.68±6.34)明显低于LPS刺激组细胞增殖比(79.51±10.60)(P<0.05)显示维生素D3能够明显抑制LPS诱导细胞增殖；同时使用全波长分光光度仪(酶标仪)检测细胞OD值,LPS刺激组细胞细胞OD值为：(6.28±4.43)明显高于对PBS对照组(0.75 ±0.13)(P<0.05)显示LPS能够促进细胞增殖；LPS+维生素D3刺激组细胞OD值为：(4.08±0.93)明显低于LPS组(6.28±0.43)(P<0.05)显示LPS+维生素D3刺激组能够明显抑制LPS诱导细胞增殖；LPS+维生素D3刺激组细胞OD值为：(4.08±0.93)高于PBS对照组(0.75±0.13)(P<0.05)显示LPS+维生素D3刺激组存在细胞增殖。5、共聚焦荧光显微镜观察增殖细胞在NF-kB磷酸化表达：LPS刺激组增殖细胞比为：(80.63±7.92)明显高于对PBS对照组(9.72±1.34) (P<0.05)显示LPS能够促进细胞增殖；LPS+维生素D3刺激组细胞增殖比为：(40.32±4.32)明显低于LPS刺激组(80.63±7.92)(P<0.05)显示LPS+维生素D3刺激组能够明显抑制LPS诱导细胞增殖；LPS+维生素D3刺激组细胞增殖比为：(40.32±4.32)高于PBS对照组(9.72±1.34)(P<0.05)显示LPS+维生素D3刺激组存在细胞增殖。共聚焦荧光显微镜观在察NF-kB细胞增殖比：LPS刺激组细胞增殖比为：(70.49±7.64、39)明显高于PBS对照组(11.12±1.27)(P<0.05)显示LPS能够促进细胞增殖；LPS+维生素D3刺激组细胞增殖比为：(39.11±3.72)明显低于LPS刺激组(70.49±7.64、39)(P<0.05)显示LPS+维生素D3刺激组能够明显抑制LPS诱导细胞增殖；LPS+维生素D3刺激组细胞增殖比为：(39.11±3.72)高于PBS对照组(11.12±1.27)(P<0.05)显示LPS+维生素D3刺激组存在细胞增殖。6、用免疫印迹方法检测NF-kB,NF-kB磷酸化和TNF-a表达,结果显示：LPS能明显诱导NFkB表达, NF-kB磷酸化和TNF-a表达,其光密度与Actin比较,LPS刺激组 NF-kB磷酸化(1.928±0.031)较PBS对照组(0.732±0.018)表达水平增高(P<0.05),表明LPS能诱导NF-kB磷酸化表达；LPS+维生素D3刺激组NF-kB磷酸化(0.972±0.024)较LPS刺激组(1.928±0.031)表达水平减低(P<0.05),表明维生素D3能抑制LPS诱导NF-kB磷酸化表达。LPS组NF-kB光密度( 1.546 ± 0.058)较PBS对照组(0.841±0.014)表达水平增高(P<0.05),表明LPS能诱导NFkB表达；LPS+维生素D3刺激组NF-kB光密度(0.993 ±0.032)较LPS刺激组(1.546±0.058)表达水平减低(P<0.05),表明维生素D3能抑制LPS能诱导NF-kB表达；LPS刺激组TNF-α光密度(1.176±0.041)较PBS对照组(0.891±0.027)表达水平增高(P<0.05),表明LPS能诱导TNF-α表达；LPS+维生素D3刺激组TNF-α光密度(1.004±0.039)较LPS刺激组(1.176±0.041)表达水平减低(P<0.05),表明维生素D3能抑制LPS诱导的TNF-a表达。结论：1.LPS能够诱导人B淋巴母细胞发生氧化应激,维生素D3能有效的抑制LPS诱导人B淋巴母细胞的氧化应激。2.LPS能够诱导人B淋巴母细胞的DNA损伤,维生素D3能有效的抑制LPS诱导人B淋巴母细胞的DNA损伤。3.LPS不能诱导人B淋巴母细胞的凋亡,但能诱导细胞增殖,维生素D3能有效的抑制LPS诱导人B淋巴母细胞的细胞增殖。4.维生素D3能有效抑制在细胞因子NF-kB磷酸化,NF-kB表达和TNF-a表达。