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慢性粒细胞白血病（Chronic Myelogenous Leukemia, CML）是一种起源于多能造血干细胞异常克隆的恶性增殖性疾病。绝大多数慢粒患者白血病细胞中具有Ph染色体，Ph染色体是9号染色体长臂3区4带和22号染色体长臂1区1带的相互易位，即t（9；22）(q34,q11)，结果使位于9q34的C-abl原癌基因在第二外显子的5’端断裂并易位到22q11的M-bcr基因第2或第3外显子的3’端，形成异常的bcr-abl嵌合基因，该基因转导出异常的mRNA，编码并翻译出P21O蛋白，具有很强的酪氨酸激酶活性，使粒细胞发生恶性增殖，在慢粒发病中起重要作用。 CML的治疗方法很多，目前异基因骨髓移植被认为有可能使慢粒得到治愈，但鉴于HLA配型困难以及患者自身年龄、身体状况等多种条件的制约，限制了其在床的应用；自体骨髓移植由于缺乏可靠的体外净化比技术，残留的白血病细胞易于复发；大剂量长疗程的干扰素治疗可使慢粒患者出现不同程度的细胞遗传学反应；常规化疗只能使慢粒患者获得血液学的缓解。故寻找彻底治疗慢粒的有效方法，仍是一个迫切需要解决的问题。 CyclinD1是细胞周期的启动因子，在细胞周期Gl/S转换中起关键作用，其异常表达与bcr-abl融合基因共同参与了慢粒的发生、发展进程。特异性针对bcr-abl的酪氨酸激酶抑制剂，可阻断信号传导途径，干扰细胞代谢关健酶，促使CML细胞凋亡，并可诱导白血病细胞向正常细胞分化，其中STI 571已成功进入临床应用，取得了可喜的成绩，但仍不能彻底纠正CML的恶性表型。应用CyclinD1反义核苷酸， 第四军医大学硕士研究生论文使细胞周期调控功能恢复正常，与酪氨酸激酶抑制剂协同作用治疗＊ML，有可能取得更好的疗效。 Cyc mDI反雌昔硼肺癌、能癌和骨肉瘤细帆中喇胞恶贿生酬、恶性表型逆转、诱导凋亡等方面的研究已取得一定成果，｛l；IJSRflj CyClinDI反义g酸治疗CML的体外实验尚未见文栅随。本实验首次将CyClinDI反 昔酸与酪氨酸激淑印制剂Geiewin If－c．－－－－mx用于K562细胞，以研究CyClinDI与Gehaein对K562细胞周期调控、凋亡等的影响，对CML的治疗有一定的指导意义。 本实验用Gdstein及CyClinDI反义核昔酸作用于K562细胞后，通过细胞培养、电镜、流式细胞仪、RTPCR ％b－uxxxxx察了K562细胞的生长增殖改变、细胞周期变化、凋亡、CDK4蛋白表达，以及 CyMI基因和 ed融－ai－－＊因 InRNA的表达，从细胞增殖和细胞周期调控的不同角度探讨慢粒的发病机帘u及对CML白血病细a曾殖抑制效果。实验结果表明：(1用enistein及 CyClinDI反义核昔蹦g测U K562细胞生长，抑制峨与剂酯正相关。细胞sds的生u时间约为她h，峨xh内台盼兰染色未见死细胞。① Gdstein阻滞K562细胞生长主要在GW期，GZ期细胞明显增加，S期细胞明显减少；CyclinDI反义核苦酸使细胞K562细胞阻滞于GO／GI期，S期细脚B应删；Gehistein与CyClinDI反义核苦酸联合作用使K562细胞发生GZ ／M期和GO／GI期双重阻滞，S期细脚妙湖砒于单一试孤阶他合成与复制峨氏，K562细胞增殖受抑。（3）Genistds能诱导 K562细胞凋亡，流式细胞仪检测在细胞周期图中的二倍体峰前可见一亚二倍体峰——凋亡峰。电镜观察，＊e山幻eh峨24h后，可铡早期凋亡细胞：作用轮h后，可翩典型的凋亡细胞和凋亡小体。CyclinDI反义核昔酸未见明显凋亡诱导作用，但与Genistein联合应用，可使凋亡细胞明显增加，凋亡比例从2％上升至10％。mh卜suh能明显抑制be，－abl融合基因mguA的表达，间接抑制CyclinDI基因IllltNft的表达。CyclinDI反义核昔酸能抑制CyclinDI的mRNA的表达，间剧m制her－abl融合基因觎 的表达。m在K562细胞中，Genistein抑制P210蛋白的高＠臆懈撇酶活性，是CDK4蛋白表达下降的基R【Z。 本实验证实＊nkd且工及＊h且】DI 反义核什酸设o以皿1凋控到肌W叨尹诱导凋 ．4． 第四军医大学硕土研究生论文亡、抑制her－abl M！li．＊’－r因及CyclinDI基因表达而对CML白血病细胞发挥抑＄峭殖作用。Geistein与CyClinDI反义核昔酸联合应用能崛娜效果，为治疗CML提供了新的思路禾o方法。