新型SHIV感染性克隆的构建与筛选及猴NK细胞亚群的研究

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SHIV,即SIV/HIV嵌合病毒,是利用基因重组技术,将SIV和HIV的相应基因进行置换而构建出来的重组嵌合病毒。SHIV/恒河猴动物模型是研究AIDS疫苗、药物及HIV致病机理的重要工具。尽管目前中国艾滋病传播形势相当严峻,但是仍然没有构建出嵌合中国株HIV基因并能够快速发病的SHIV病毒,对于中国源恒河猴的研究也刚刚起步。 为了构建中国SHIV/恒河猴动物模型,本文做了两个方面的基础研究:一是中国SHIV的构建;二是中国源恒河猴体内NK细胞的亚群分布情况。一旦感染性SHIV构建成功,即可选择合适猴子构建动物模型。为研究调节基因在SHIV致病性中作用,本文从5份HIV分子流行病学调查的阳性样品(HIV-XJN0021,HIV-XJN003l,HIV-XJN0041,HIV-XJN005l,HIV-XJN0061)和2份新疆队列样品中(HIV-XJDCl353和HIV-XJDC0135)PCR扩增到5份含有中国HIV-1毒株tat,rev&vpu基因1.2kb的目的片段,以SHIV-89.6P的半长克隆株3’-SHIV-KB9为主要骨架,将相应的片段进行替换,构建成40个半长克隆,并通过酶切分析及序列分析证明其序列多态性。将半长克隆与5’-SHIV-KB9连接,经过鉴定,得到了26个携带中国主要流行亚型B/C不同毒株tat,rev&vpu基因的SHIVcDNA嵌合克隆。分别将这些重组病毒cDNA转染293T细胞,确定其蛋白表达情况及病毒包装情况。收集转染阳性的克隆上清感染PM1细胞,以确定其感染力。结果显示并未得到感染力强的SHIV克隆,还需构建更多的克隆进行筛选。 同时,本文利用多色流式技术对中国源恒河猴体内的NK细胞的亚群分布情况进行了研究。通过六色流式技术,用两种定义方法统计17只正常恒河猴体内NK细胞的数量,并比较各亚群细胞的表面因子分布,从而确立了NK细胞亚群的定义方法,得到猴体内正常状态下NK细胞及各亚群细胞的水平,为筛选合适的受体猴提供了技术参数。此外,分析了两只感染SHIV病毒的猴体内NK细胞各个亚群随着病程进展的变化情况,为进一步研究SHIV/恒河猴动物模型提供支持。
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