论文部分内容阅读
目的:1.探究GLP-1/GIP双受体激动剂DA3-CH和GLP-1单受体激动剂利拉鲁肽对合并有糖尿病的脑缺血再灌注损伤大鼠模型的神经保护作用(神经功能缺损评分、梗死面积)。2.探究DA3-CH和利拉鲁肽对合并有糖尿病的脑缺血再灌注损伤大鼠模型内质网应激及细胞凋亡的影响,由此阐明其对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护机制(内质网应激相关蛋白、凋亡相关蛋白)。3.观察比较DA3-CH和利拉鲁肽在合并有糖尿病的脑缺血再灌注损伤大鼠模型中神经保护作用的强弱及对内质网应激、细胞凋亡的影响的大小。方法:1.分组:将72只SD雄性大鼠随机分为4组:①空白组(Sham组,n=18);模型组(Saline组,n=18);DA3治疗组(DA3组,n=18);利拉鲁肽治疗组(Lir组,n=18)。2.干预措施:Sham组不给予任何处理,仅同其他组在相同环境下饲养。其余3组使用STZ诱导糖尿病模型,糖尿病造膜成功后,腹腔注射DA3-CH、利拉鲁肽(10mmol/kg,1 次/天)。3.测定方法:腹腔注射药物14天后,测量大鼠血糖。随后Saline组、DA3组、Lir组进行脑缺血再灌注模型(MCAO)的制备,缺血2小时,再灌注22小时后,评测改良神经系统严重程度评分(mNSS评分),断头取脑,用TTC染色法测定脑梗死面积,用免疫组化法和蛋白印迹法(Western B1 ot)测定内质网应激相关蛋白(GRP78、CHOP、Capase12)、凋亡相关蛋白(NEUN、Bax、Bcl-2)的表达水平。结果:1.血糖水平:药物干预组的的血糖水平低于模型组(DA3:21.55±1.66vs24.5±2.53,P<0.01;Lir:20.90±2.30vs24.5±2.53,P<0.01),但 DA3-CH 组、利拉鲁肽组的血糖水平无明显差别(21.55±1.66vs20.90±2.30,P>0.05)。2.梗死面积:药物干预组的的梗死面积小于模型组(DA3:12.58±3.85vs39.57±3.12,P<0.001;Lir:18.69±2.90vs39.57±3.12,P<0.001),DA3 组的梗死面积小于利拉鲁肽组(12.58±3.85vs18.69±2.90,P<0.01)。3.改良神经系统严重程度评分(mNSS):药物干预组的mNSS评分小于模型组(DA3:8.67±1.63vs12.50±1.76,P<0.001;Lir:10.50±1.08vs12.50±1.76,P<0.01),DA3 组的 mNSS 评分小于利拉鲁肽组(8.67±1.63vs10.50±1.08,P<0.05)。4.内质网应激相关蛋白的表达水平4.1.内质网应激标志物GRP78的表达水平:免疫组化结果显示:药物干预组的大脑皮层的GRP78阳性细胞数少于模型组(DA3:10.00±2.68vs33.33±1.89,P<0.001;Lir:15.67±1.85vs33.33±1.89,P<0.001);DA3-CH组的GRP78阳性细胞数少于利拉鲁肽组(10.00±2.68vs15.67±1.85,P<0.001)。蛋白印迹结果显示:药物干预组的大脑皮层的GRP78表达量小于模型组(DA3:0.50±0.11vs0.73±0.14,P<0.001;Lir:0.58±0.13vs0.73±0.14,P<0.001);DA3-CH 组的 GRP78 表达量小于利拉鲁肽组(0.50±0.11vs0.58±0.13,P<0.001)。4.2内质网应激损伤蛋白CHOP、Capase12的表达水平:免疫组化结果显示:药物干预组的大脑皮层的CHOP阳性细胞数少于模型组(DA3:8.67±1.37vs39.67±2.25,P<0.001;Lir:12.33±1.77vs39.67±2.25,P<0.001),DA3-CH组的CHOP阳性细胞数少于利拉鲁肽组(8.67±1.37vs12.33±1.77,P<0.01)。药物干预组的大脑皮层的Capase12阳性细胞数少于模型组(DA3:12.67±1.37vs30.00±1.79,P<0.001;Lir:15.67±2.73vs30.00±1.79,P<0.001),DA3-CH组的Capase12阳性细胞数少于利拉鲁肽组(12.67±1.37vs15.67±2.73,P<0.01)。蛋白印迹结果显示:药物干预组的大脑皮层的CHOP表达量小于模型组(DA3:0.49±0.04vs0.84±0.08,P<0.001;Lir:0.76±0.03vs0.84±0.08,P<0.001),DA3-CH 组的 CHOP 表达量小于利拉鲁肽组(0.49±0.04vs0.76±0.03,P<0.001);药物干预组的大脑皮层的Capase12表达量小于模型组(DA3:0.45±0.08vs0.68±0.12,P<0.001;Lir:0.47±0.07vs0.68±0.12,P<0.001),DA3-CH组的 Capase12 表达量小于利拉鲁肽组(0.45±0.08vs0.47±0.07,P<0.01)。5.凋亡相关蛋白的表达水平5.1神经元存活标记物NEUN的表达水平免疫组化结果显示:药物干预组的大脑皮层的NEUN阳性细胞数多于模型组(DA3:24.56±2.25vs10.67±1.86,P<0.001;Lir:18.43±2.35vs10.67±1.86,P<0.001);DA3-CH组的NEUN阳性细胞数多于利拉鲁肽组(24.56±2.25vs18.43±2.35,P<0.001)。蛋白印迹结果显示:药物干预组的大脑皮层的NEUN表达量大于模型组(DA3:0.66±0.08vs0.46±0.09,P<0.001;Lir:0.58±0.09vs0.46±0.09,P<0.001);DA3-CH 组的 NEUN 表达量大于利拉鲁肽组(0.66±0.08vs0.58±0.09,P<0.001)。5.2促存活因子Bcl-2和促凋亡因子Bax的表达水平蛋白印迹结果显示:药物干预组的大脑皮层的Bax表达量小于模型组(DA3:0.33±0.03vs0.69±0.17,P<0.001;Lir:0.45±0.15vs0.69±0.17,P<0.001),DA3-CH 组的 Bax 表达量小于利拉鲁肽组(0.33±0.03vs0.45±0.15,P<0.001)。药物干预组的大脑皮层的Bcl-2表达量大于模型组(DA3:0.75±0.07vs0.38±0.04,P<0.001;Lir:0.58±0.05vs0.38±0.04,P<0.001),DA3-CH组的 Bcl-2 表达量大于利拉鲁肽组(0.75±0.07vs0.58±0.05,P<0.001)。结论:1.DA3-CH和利拉鲁肽在合并有糖尿病的脑缺血再灌注损伤大鼠模型中神经保护作用明显,可减少梗死面积,降低神经功能缺损评分。2.DA3-CH和利拉鲁肽在合并有糖尿病的脑缺血再灌注损伤大鼠模型中发挥神经保护作用是通过抑制内质网应激,从而减少细胞凋亡实现的。3.DA-CH在合并有糖尿病的脑缺血再灌注损伤大鼠模型中的神经保护作用、对内质网应激和细胞凋亡的抑制作用均强于利拉鲁肽。