犬瘟热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)引起的一种发病率和病死率都很高的急性传染病,该病对犬科动物、毛皮经济动物及野生动物的危害极大。因此,加强对CD的预防与控制的研究,能够减少经济动物的损失,而建立快速和有效的CDV检测方法是目前该研究的重点。本研究采用单克隆抗体技术制备抗CDV核蛋白单克隆抗体,获得了高表达抗CDV的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。主要方法是:将犬瘟热病毒纯化后免疫雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经克隆和间接ELISA筛选,获得6株稳定分泌抗犬瘟热病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经过鉴定:其腹水效价分别为1:1×10~7、1:1×10~7、1:1×10~7、1:1×10~5、1:1×10~4、1:1×10~4 ;且与狂犬病病毒(RV),犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV)不发生交叉反应; Western-blot分析表明,6株单抗均为抗犬瘟热病毒核蛋白单抗。采用G蛋白亲和层析柱对腹水进行纯化,将纯化后的单抗腹水用FITC(异硫氰酸荧光素)标记制备荧光抗体,并对该荧光抗体进行鉴定。吸收试验、阻断试验和与CPV、RV及CAV的交叉试验表明,所制备的荧光抗体具有特异性强、敏感性高的特点;应用该技术制备的单克隆抗体对感染CDV的细胞进行了检测。结果表明,该单克隆抗体显示了对CDV的高特异性,用该抗体制备的荧光抗体在对CDV的实验室诊断中具有快速和特异性高的特点。