鲍曼不动杆菌对临床大多数抗生素存在耐药性,已成为最常见的“超级细菌”之一,常引起呼吸道感染、菌血症、脑膜炎等严重疾病。因此,预防鲍曼不动杆菌的传播与感染迫在眉睫,开发疫苗则是最有效的手段。目前已有针对鲍曼不动杆菌的灭活疫苗、DNA疫苗和重组亚单位疫苗等正在研究中,但未有一种疫苗进入临床试验阶段。而且,现有的疫苗存在着周期长、免疫原性弱、安全性低等缺点,急需开发有效的新型疫苗用于防治鲍曼不动杆菌的感染。本课题组前期工作开发了重组减毒沙门氏菌疫苗载体χ9241,其可携带外源抗原定植到机体免疫器官,且自带佐剂特性,能诱导强大的免疫反应。因此,本研究针对鲍曼不动杆菌开发了一种基于χ9241的细菌载体疫苗用于预防该细菌感染。本研究根据鲍曼不动杆菌的生物学特点及外膜结构,选择了以外膜蛋白A（OmpA）作为其疫苗抗原靶点,并根据OmpA蛋白的抗原表位分析结果,分别设计了蛋白疫苗Ab TompA和减毒沙门氏菌载体疫苗χ9241-rompA。为了达到最佳的免疫效果,本研究选择了序贯加强免疫策略,即χ9241-rompA与Ab TompA疫苗的联合免疫策略,结合这两种疫苗的优势,以期望诱导强大的免疫反应来保护小鼠抵抗鲍曼不动杆菌的攻击。本研究的主要实验内容及结果如下:1.采用生物信息学方法分析鲍曼不动杆菌OmpA的表位,分别构建了鲍曼不动杆菌全长OmpA蛋白（Ab FompA）、鲍曼不动杆菌OmpA蛋白疫苗（Ab TompA）及携带重组OmpA质粒的减毒沙门氏菌载体疫苗（χ9241-rompA）。其中,Ab FompA用于免疫家兔来获得阳性血清用于后续的蛋白鉴定。2.采用序贯加强免疫策略,将χ9241-rompA与Ab TompA联合免疫BALB/c小鼠,评价该策略在小鼠体内诱导的免疫反应。结果发现,联合疫苗组与单一疫苗组χ9241-rompA或Ab TompA相比,可诱导更高水平的抗OmpA总Ig G和粘膜IgA,并诱导更平衡的Th1/Th2免疫反应,同时高效刺激脾细胞的增殖,产生更高水平的IFN-γ。所有疫苗组均能活化DC、B细胞,提高CD4+T细胞和Th17细胞的比例。3.与单一疫苗组相比,χ9241-rompA与Ab TompA联合免疫组血清能更显著的抑制鲍曼不动杆菌的生物活性,包括黏附、迁移和生物被膜的形成。4.本研究分别以鲍曼不动杆菌通过腹腔和鼻腔感染小鼠后引发的系统性脓毒症和肺部炎症为模型,在小鼠体内评估疫苗是否能抵抗细菌标准株和耐药株的攻击。结果发现,χ9241-rompA与Ab TompA联合免疫组可以提高小鼠生存期,降低血清细胞因子IL-6的水平,减轻肺部组织病理损伤。本研究不仅为鲍曼不动杆菌的疫苗研究提供了多种候选疫苗,也为沙门氏菌载体的开发及序贯加强免疫策略的应用提供了新的实验基础。