AtATM3和CYP2E1基因增强转基因紫花苜蓿抗重金属和有机物能力研究

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近年来,随着工业化进程的加快,我国的环境污染形势日益严峻,土壤污染问题凸显,严重阻碍经济发展和损害人体健康,因此控制与修复土壤污染势在必行。目前,土壤污染修复主要包括物理/化学修复和生物修复两大类。植物修复技术因更加快速、高效、费用低,且便于推广,近年来呈现出良好的发展前景。本研究旨在利用转基因技术将两个基因转入紫花苜蓿以提高其对土壤重金属和有机物复合污染的修复能力;AtATM3和细胞色素氧化酶基因CYP2E1是两种分别与重金属和有机物抗性、积累相关的基因。目前,国内外尚未出现同时利用这两个基因进行土壤修复的报道。实验构建含有CYP2E1基因的植物表达载体:用目的基因替换表达载体pBI121上的Gus基因,构建P35S-CYP2E1-T35S表达盒,即质粒pBI121-CYP2E1。然后通过冻融法将表达载体pBI121-CYP2E1,同另一植物表达载体pCambia-AtATM3转入同一农杆菌LBA4404中。实验选取“阿尔冈金”紫花苜蓿下胚轴作为基因转化受体,通过组织培养研究,筛选并优化胚性愈伤组织的诱导分化条件,构建并优化了适合“阿尔冈金”的遗传转化再生体系。经共转化将AtATM3基因和CYP2E1基因导入“阿尔冈金”紫花苜蓿中。经共培养、选择培养最终获得了186株抗卡那霉素的转基因植株。筛选出的186株抗性植株应用PCR和RT-PCR进行分子学水平检测后,对转基因植株的抗重金属和有机物功能进行了鉴定。结果表明所获得抗性紫花苜蓿植株整合了外源目的基因AtATM3和CYP2E1并有效表达。
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