重组犬α干扰素活性检测及对犬细小病毒病的疗效研究

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干扰素(IFN)是一种优良的抗病毒、抗肿瘤及免疫调节细胞因子,自被发现以来,干扰素在人类疾病治疗及保健方面得到了广泛应用。重组犬α干扰素系将含有重组犬α干扰素基因的重组质粒转染大肠杆菌,通过高密度发酵培养而得,对犬病毒性疾病具有较好疗效。在重组犬α干扰素新兽药的研究中,生物学活性是评价产品效果的关键指标,只有活性良好产品,在临床上才有切实应用价值。本课题主要研究了重组犬α干扰素生物学活性检测方法,并用不同剂量的重组犬α干扰素对人工复制的犬细小病毒进行药效学研究,具体研究如下:1、在重组犬α干扰素的生物学活性检测方法的研究中,将MDCK细胞用常规传代方法进行培养,通过细胞浓度优化选择试验,选择每毫升含30~40万个细胞的浓度,在5%CO2培养箱内,37℃静置培养24小时,在培养好的单层细胞上接种不同浓度的重组犬α干扰素,在5%CO2培养箱内,37℃培养24小后用VSV病毒进行攻击,再置37℃5%CO2培养箱内培养,待病毒对照孔75%以上细胞出现病变时,结束攻毒,用结晶紫染色液进行染色,在波长570nm处测定吸光度,通过四参数回归计算法进行数据处理,从而计算出待测样品的活性。研究结果表明,本试验判定方法采用结晶紫染色后在570nm波长处测定吸收度值,与常规细胞病变法相比,简单、人为误差小,通过精密度和重现性试验验证,该方法精密度高、重现性好。2、为了验证重组犬α干扰素对病毒性疾病的疗效,我们将犬细小病毒接种55~70日龄未接种过犬细小病毒疫苗的毕格犬,待其出现明显的临床症状时用经过上述细胞病变法检测含有高生物学活性的重组犬α干扰素进行治疗。研究结果表明,配合补液、抗菌、止血、止吐、退热等辅助措施,重组犬α干扰素按40万IU/kg体重对人工复制犬细小病毒病的有效率达100%。通过用不同剂量的重组犬α干扰素对人工复制犬细小病毒病的治疗结果表明,重组犬α干扰素治疗结果与使用剂量呈正相关性,即随着重组犬α干扰素剂量(以细胞效价表示)增加,对犬治愈率增加,死亡率降低。通过三批重组犬α干扰素对人工复制犬细小病毒病的重复治疗试验表明,重组犬α干扰素对犬细小病毒病治疗效果稳定。通过研究得出,采用细胞病变抑制法结合结晶紫染色后在570nm波长处测定吸收度值,并用四参数回归计算法进行数据处理,用该方法测定重组犬α干扰素的生物学活性精密度高、重现性好;按40万IU/kg体重的剂量,并配合补液、抗菌、止血、止吐、退热等辅助措施,对人工复制犬细小病毒病的治疗效果确实、且疗效稳定。
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